猫传染性腹膜炎病毒RT-PCR检测方法的建立及核衣壳蛋白的表达

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猫传染性腹膜炎属于高感染率低发病率、慢性、渐进性、致死性传染病,以腹膜炎、大量腹水积聚及致死率较高为主要特征,其临床症状不具有明显的特征性,因此对于诊断有一定的难度。 临床上疑似猫传染性腹膜炎的患病猫5只,经组织病理学诊断,确诊为猫传染性腹膜炎。设计一对特异性引物,进行RT-PCR扩增,结果5只猫均为阳性,对临床疑似猫传染性腹膜炎的44例腹水或胸水进行RT-PCR检测,其中有30例为阳性,14例为阴性。 FIPV的N蛋白是结构蛋白,长度为377个氨基酸,处于病毒颗粒的核心,在病毒结构中起重要作用。通过对自然感染病例N基因的测序和比较,分析我国FIPV的N蛋白抗原变化情况。采用RT-PCR方法扩增FIPV的N基因,分别从10份FIPV阳性材料中获得N基因的完整序列,发现获得的氨基酸序列存在变化,429缺失一个氨基酸,408缺失一个氨基酸同时又插入2个氨基酸,其余8株均为377个氨基酸。 设计表达引物,通过RT-PCR进行扩增,成功构建了表达载体。pGEX-N。重组表达蛋白以包涵体的形式存在于大肠杆菌中,融合蛋白N的分子量为68.7KDa,Western-blot分析表明N蛋白与FIPV抗血清产生特异性反应。FIPV N蛋白的表达为其免疫原性和蛋白功能研究奠定了一定的基础。
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