天麻素修饰的聚氨酯多孔薄膜在周围神经损伤修复中的应用研究

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[目的]制备含不同配比量的天麻素(Gastrodin)聚氨酯(Polyurethane,PU)神经薄膜。通过对薄膜进行理化性能表征及生物相容性评价,探讨Gastrodin/PU与PU的差异,以及Gastrodin/PU作为外周神经损伤修复支架材料的潜在性。[方法]采用原位聚合法以聚己内酯(Polycaprolactone,PCL2000)和异佛尔酮二异氰酸酯(Isophorone diisocyanate,IPDI)为原料,赖氨酸乙酯二盐酸盐(Lysine ethyl ester dihydrochloride,Lys-OEt 2HCl)为扩链剂反应获得预聚物,然后加入不同质量的天麻素,成功制备出四种不同天麻素配比量的支架。根据天麻素在聚合物中的质量分数比 0%、0.5%、1%、5%,分别记为 PU、0.5 Gastrodin/PU、1 Gastrodin/PU、5 Gastrodin/PU。接下来,将聚合物用有机溶剂1,4-二氧六环溶解,加入直径<50μm的NaCl颗粒作致孔剂(W样品:WNaCl=1:2),利用盐浸渍析出法,构建神经薄膜。通过傅立叶变换红外光谱仪(F ourier transform infrared spectro scopy,FTIR)、1H核磁共振(1H nuclear magnetic resonance,1HNMR)检测薄膜的功能团和化学组成;扫描电子显微镜(Scanning electron microscopy,SEM)观察神经薄膜的形貌结构;万能力学试验机测试薄膜的力学性能;热重量分析(Thermogravimetric Analysis,TGA)表征薄膜的热降解性能;接触角测试仪检测神经薄膜的亲疏水性;凝胶渗透色谱(Gel permeation chromatography,GPC)分析薄膜的分子量大小及其分布。体外细胞实验,将PC12细胞接种于薄膜上,借助扫描电镜、活死细胞染色(Live/Dead staining)观察材料表面细胞的黏附、铺展、增殖情况;活细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测细胞活性。实时定量聚合酶链式反应(Quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测脑源性神经营养因子(Brain derived neurotrophic factor,BDNF),胶质源性神经营养因子(Glialcell derived neurotrophic factor,GDNF)的基因表达。[结果]神经薄膜具有高度贯通的多孔结构,孔径范围在10~60 μm之间。与PU薄膜相比,5Gastrodin/PU神经薄膜的杨氏模量、热稳定性以及亲水性显著增加。将PC12细胞接种到神经薄膜上,Gastrodin/PU薄膜更有利于细胞的粘附、铺展和增殖,表明这些支架无细胞毒性,其中5Gastrodin/PU能显著上调BDNF和GDNF的基因表达。[结论]5Gastrodin/PU多孔神经薄膜具有良好的柔韧性和支撑机械强度,还具有优异的亲水性和生物相容性,可进一步构建神经导管,有望用于周围神经修复和再生。
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