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本研究采用RT-PCR和血清学相结合的方法对从广西4个市采集的马肺组织样品和马血清进行H9N2亚型流感病毒的检测,从284份马肺组织样品接种鸡胚后收取的尿囊液中,检测出1份阳性,阳性率为0.35%；而检测的1110份马血清,H9N2亚型阳性有7份,阳性率为0.54%。应用鸡胚接种的方法分离出一株病毒,通过血凝抑制实验及对8个片段的全基因克隆及序列分析,鉴定为H9N2亚型流感病毒,将分离株命名为A/equine/Guangxi/3/2011(H9N2)(简称GX3株)对GX3株进行鸡胚半数致死量(ELD50)和1日龄雏鸡脑内接种指数(ICPI)测定试验,其ELD50和ICPI值分别为10-643/0.2mL和0.09；经免疫效果试验证明GX3株具有较好的免疫原性；对GX3株各基因的关键位点分析发现,GX3株HA基因的氨基酸在第183、225、227及228位点处均非常保守,而在226位氨基酸为亮氨酸(Leu),具有受体SAa-2,6-Gal特异性；在HA裂解位点处含有2个碱性氨基酸,其HA1与HA2氨基酸裂解位点处的序列为RSSRGLF,具有典型的低致病性流感病毒裂解位点的氨基酸序列特征；PB2基因第627、701、714位氨基酸分别为谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、丝氨酸(Ser),PB1-F2蛋白的第66位氨基酸为天冬酰胺(Asn),NP基因第319位氨基酸为天冬酰胺(Asn),NS1蛋白的第92位氨基酸为天冬氨酸(Asp),这些都说明GX3株为低致病性毒株。糖基化位点分析中,HA和NA基因均具有8个糖基化位点,其中HA在第313位氨基酸处比参考毒株多出一个糖基化位点,NA在第44位氨基酸位点处比参考毒株多出一个糖基化位点,而其余的糖基化位点均比较保守,没有出现明显改变。耐药性基因位点分析中,NA基因119E、151D、276E、292R、294N,表明GX3株对神经氨酸酶抑制类药物敏感；M2基因S31N,表明GX3株具有金刚烷胺类药物的抗性。通过系统进化树及核苷酸同源性分析可知GX3株各个基因片段的大体来源：PB2和M基因来源于G1-like亚系毒株,PB1、PA和NP基因来源于SH/F/98-like亚系毒株,NA基因来源于G9-like亚系毒株,HA和NS基因来源于BeiJing亚系毒株。可见,本研究的GX3毒株的基因片段来源于4个经典的H9N2毒株,组合成了一个新的基因型。