一、背景与目的　　唇腭裂是最常见的先天性畸形之一，它对患者、家庭以及社会都带来了沉重的创伤，目前唇腭裂的发病机制尚未明确。基于本课题组前期通过microRNA芯片技术，我们筛选出实验组和对照组间有显著差异的microRNA，并通过数据库预测出其潜在靶基因。本实验旨在通过对miRNA-106a-5p和其下游靶基因Tgfbr2的研究，探索miRNA-106a-5p在腭裂发生过程中的作用机制。　　二、方法　　1、建立维甲酸诱导腭裂模型：将24只怀孕KM小鼠随机分为实验组和对照组，每各组12只。在胚胎发育10.5天，实验组小鼠以70mg/kg剂量的维甲酸灌胃，对照组小鼠使用植物油灌胃；　　2、在胚胎发育13.5天、14.5天、15.5天、16.5天处死小鼠，观察胚鼠腭部大体形态，统计腭裂发生率，并提取腭突组织，保存在-80℃冰箱以用于后续实验；　　3、运用RT-qPCR技术检测miRNA-106a-5p、Tgfbr2在实验组和对照组的表达水平；　　4、运用双荧光素酶实验验证Tgfbr2为miRNA-106a-5p下游靶基因；　　5、提取胚胎发育13.5天小鼠腭突组织，进行腭突间充质细胞培养，运用lipo 2000向细胞内转染miRNA mimic和miRNA-NC，培养24小时后，检测细胞形态学变化；　　6、运用Western blot技术检测TGF-Beta信号通路相关蛋白表达水平。　　三、结果　　1、RT-qPCR结果显示实验组miRNA-106a-5p表达水平明显较对照组上调（P<0.05），而Tgfbr2在实验组的表达水平较对照组明显下调（P<0.05）；　　2、双荧光素酶报告系统检测结果显示：突变型（Tgfbr2-Mut）+miR-106a-5p mimic共转染组的荧光素酶活性相对NC组无明显变化（p>0.05），野生型（Tgfbr2-WT）+miRNA-106a-5p共转染组的荧光素酶素酶活性相对阴性对照组组显著降低（p<0.05），因此我们认为miRNA-106a-5p可以调控Tgfbr2的表达；　　3、向腭突间充质细胞中转染miRNA-106a-5p mimic，miRNA-NC，培养24小时后，流式细胞术检测细胞凋亡情况，发现转染miRNA-106a-5p mimic组的腭突间充质细胞凋亡明显增加（P<0.05）；　　4、Western blot结果显示，TGFBR2，以及磷酸化的SMAD2/3蛋白水平降低。　　四、结论　　1、miRNA-106a-5p表达上调导致腭突间充质细胞凋亡率增加，导致腭裂的发生；　　2、miRNA-106a-5p可能通过调控TGF-Beta信号通路导致了腭裂的发生。