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背景:内皮间质转化(endothelial-mesenchymal transition,EndMT)是指内皮细胞在各种生理或病理状态下其细胞的结构和功能发生显著变化,内皮细胞间的连接逐渐减弱,慢慢失去内皮细胞的表型特征,内皮细胞特异性标志物也逐渐降低,相反间质细胞的特异性标志物表达上调,最后表现出成纤维细胞特征的病理过程。在心肌纤维化(myocardial fibrosis,MF)这一病理改变的过程中,EndMT参与了MF病变的发生发展,逐渐导致患者心脏收缩和(或)舒张功能减低,表现出慢性心功能不全、难治性心力衰竭的临床症状,甚至可能发生猝死。同时全球慢性心力衰竭患者群体庞大,严重影响患者生存质量,还造成极大的社会负担。学术界发现了环指蛋白广泛表达于真核生物细胞中,这类蛋白主要参与调节了细胞周期和细胞凋亡的调控以及细胞内(间)信号传导等多种生理活动,其中Kip1泛素-促进复合体1(Kip1 ubiquitination-promoting complex 1,KPC1)就是一类含有环指结构域的泛素连接酶。目前已有研究证实,在大鼠颈总动脉球囊损伤模型中KPC1的表达量明显降低;在TGF-β诱导的内皮细胞中KPC1信使RNA(messenger RNA,mRNA)水平明显升高。由此猜想,各种减少KPC1表达的干预因素,可通过抑制内皮间质转化过程,最终减少心肌纤维化发生。目的:探索KPC1在人冠状动脉内皮细胞内皮间质转化过程中的表达特征,及其影响表型转变的机制。方法:以人冠状动脉内皮细胞(human coronary artery endothelial cells,HCAECs)为研究对象,采用转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的方式构建内皮间质转化模型,利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)、免疫荧光(immunofluorescence)等方法检测KPC1的表达特征;再利用核因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)通路抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸铵(Pyrrolidinedithiocarbamate ammonium,PDTC)尝试探索KPC1是否通过调节NF-κB通路来实现其促EndMT作用;采用CCK8细胞增殖实验和划痕实验评价KPC1对HCAECs增殖和迁移能力的影响。结果:(1)在TGF-β1诱导HCAECs构建内皮间质转化模型后,免疫荧光、qRT-PCR、Western Blot的结果发现:与对照组相比,模型组的KPC1表达量升高。(2)在KPC1过表达的腺病毒转染HCAECs后,qRT-PCR、Western Blot结果发现:Ad-KPC1组与对照组相比,内皮细胞标志物如血管内皮钙黏蛋白(vascular endothelial cadherin,VE-cadherin)表达量下调,间质细胞标志物如α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达增加;但加入PDTC后,Ad-KPC1+PDTC组的VE-cadherin表达量高于Ad-KPC1组,α-SMA表达量低于Ad-KPC1组,说明KPC1的促内皮间质转化的作用被部分逆转。(3)划痕实验结果显示:Ad-KPC1组HCAECs的迁移能力较对照组、Ad-Null组和Ad-shKPC1组明显增强;CCK8细胞增殖实验结果显示:Ad-KPC1组HCAECs的增殖能力与对照组、Ad-Null组和Ad-shKPC1组相比无显著差异。结论:(1)以终浓度为10 ng/mL的TGF-β1诱导7天后成功构建HCAECs内皮间质转化模型。(2)在TGF-β1诱导的HCAECs内皮间质转化模型中,KPC1的表达量升高。(3)KPC1通过调节NF-κB通路来实现其促内皮间质转化作用。(4)KPC1能增强HCAECs的迁移能力,但对增殖能力无明显影响。