1目的建立一种可靠、高效、简便的方法,测定氨氯地平、贝那普利及其代谢产物贝那普利拉在人血浆中的浓度,进行单次及多次口服氨氯地平贝那普利胶囊在中国健康受试者体内的药物动力学研究,考察氨氯地平、贝那普利及其代谢产物贝那普利拉药动学的剂量间差异、线性特征、性别差异、蓄积情况,并观察健康志愿者服药后的不良反应,为临床合理用药提供参考依据。2方法2.1 UPLC-ESI-MS/MS法测定人血浆中氨氯地平、贝那普利及贝那普利拉2.1.1氨氯地平血样测定：血浆样品经固相萃取后真空挥干浓缩十倍处理,以卡马西平作为内标(IS),用色谱柱(ACQUITY UPLC(?) BEH C18,2.1 mm×50 mm,1.7μm)进行分离,柱温：40℃,进样室温度：10℃,流动相组成为乙腈：水溶液(含0.1%甲酸)=(35：65,V/V),流速：0.3 mL·min-1。UPLC-ESI-MS/MS法选择性监测被测物质的准分子离子峰。2.1.2贝那普利及贝那普利拉测定：血浆样品经蛋白沉淀法处理,以依那普利作为内标(IS),用色谱柱(ACQUITY UPLC(?) BEH C18,2.1 mm×50 mm,1.7μm)进行分离,柱温：40℃,进样室温度：10℃,流动相组成为甲醇：水溶液(含0.1%甲酸)=(50：50,V/V),流速：0.25 mL·min-1。UPLC-ESI-MS/MS法选择性监测被测物质的准分子离子峰。2.2药物动力学研究2.2.1单次给药24名健康志愿者,男女各半,采用随机区组设计,男女受试者各分为3组,分别单次口服氨氯地平贝那普利胶囊1、2、3粒(5mg/10mg,10mg/20mg,15mg/30mg；氨氯地平贝那普利胶囊每粒含苯磺酸氨氯地平5mg/盐酸贝那普利10mg),给药物前和给药后15.0、30.0、45.0 min,1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0、24.0、36.0、48.0、72.0、96.0、120.0、144.0 h(共20点)由静脉取血4 mL,置肝素化抗凝试管中,分离血浆存于-70℃冰箱中,以备血药浓度测定。2.2.2多次给药采用中剂量(10 mg/20 mg),8人(男女各半)。服药方法为每日1次,一次2粒(规格：每粒含苯磺酸氨氯地平5 mg／盐酸贝那普利10 mg),连续给药14天。给药时间为8：00 AM。于第1天多次给药前、第11、12、13、14日给药前,第14日在服药后按照单次给药设计采集血样。各取血点经静脉留置针取前臂静脉血4.0 mL,置肝素化抗凝试管中,分离血浆存于-70℃冰箱中,以备血药浓度测定。3结果3.1方法学结果3.1.1UPLC-ESI-MS/MS法测定人血浆中氨氯地平氨氯地平及内标在C18柱上保留较好,分离完全,氨氯地平的线性范围为0.09～30.0 ng·mL-1,r2=0.999302,最低定量限为0.09 ng·mL-1。氨氯地平的平均萃取回收率都大于85%,方法回收率都在107.7%～111.9%之间,日内日间RSD均小于9%。3.1.2UPLC-ESI-MS/MS法同时测定人血浆中贝那普利及贝那普利拉贝那普利、贝那普利拉及内标依那普利在C18柱上保留较好,分离完全,贝那普利及贝那普利拉的线性范围为1.0～1000.0 ng·mL-r2=0.997250和0.999730,最低定量限为1.0 ng·mL-1。贝那普利和贝那普利拉的平均萃取回收率都大于93.8%,方法回收率都在100.4%～103.3%之间,日内日间RSD均小于9.3%。贝那普利拉的平均萃取回收率都大于87.8%,方法回收率都在98.1%～108.8%之间,日内日间RSD均小于9.5%。3.2氨氯地平贝那普利的药物动力学3.2.1单次给药药动学参数及其在剂量间的差异3.2.1.1氨氯地平单次给药药动学参数及其在剂量间的差异单剂量口服氨氯地平贝那普利胶囊1、2、3粒(5 mg/10 mg,10mg/20 mg,15 mg/30 mg；氨氯地平贝那普利胶囊每粒含苯磺酸氨氯地平5mg/盐酸贝那普利10 mg)后氨氯地平(5 mg、10 mg、15 mg)的Tmax分别为6.0±1.1 h、7.0±3.4 h和5.6±3.0 h,三种剂量口服的达峰时间相近(P>0.05)；Cmax分别为4.37±1.37 ng·mL-1、7.23±1.81ng·mL-1和14.71±3.14 ng·mL-1,AUC0-144分别为167.7±35.9 ng·h·mL-1、283.8±47.6 ng·h·mL-1和574.9±159.0 ng·h·mL-1,AUC0-∞分别为176.8±40.2 ng·h·mL-1、304.1±54.8 ng·h·mL-1和628.2±197.5 ng·h·mL-1。说明在5-15mg剂量范围内,氨氯地平Cmax、AUC0-144、AUC0-∞与剂量相关,但其与剂量不成正比关系。t1/2分别为33.5±6.2 h、36.1±7.6 h和39.8±12.5 h,低、中、高剂量的消除半衰期相近(P>0.05),但有逐渐增加的趋势；V/F分别为1389.6±231.5 L、1724.4±269.2 L和1414.2±342.6 L；CL/F分别为29.5±6.5 L/h、34.0±7.2 L/h和25.9±7.6L/h；MRT分别为47.8±4.0 h、51.1±9.9 h和52.9±13.9 h,低、中、高三种剂量的V/F、CL/F、MRT相近,差异无统计学意义(P>0.05)。3.2.1.2贝那普利单次给药药动学参数及其在剂量间的差异单次口服1粒、2粒、3粒氨氯地平贝那普利胶囊后贝那普利(10mg、20 mg、30 mg)的Tmax分别为0.50±0.19 h、0.81±0.51 h和0.63±0.40h,三种剂量口服的达峰时间相近(P>0.05)；Cmax分别为264.10±84.95ng·mL-1、376.85±173.59 ng·mL-1和642.42±331.14 ng·mL-1,AUC0～8分别为245.9±87.7 ng·h·mL-1、450.5±122.8 ng·h·mL-1和557.6±73.5ng·h·mL-1,AUC0-∞分别为248.7±87.9 ng·h·mL-1、477.2±130.8 ng·h·mL-1和580.2±71.1 ng·h·mL-1。说明在给10-30 mg剂量范围内,贝那普利Cmax、AUC0-8、AUC0-∞与剂量呈线性相关关系,但不成正比关系,这与文献报道一致。t1/2分别为0.76±0.19 h、2.85±1.70 h和2.91±1.65 h,V/F分别为44.4±11.5 L、186.6±128.8 L和217.9±122.6 L,MRT分别为1.0±0.3 h、2.3±0.7 h和1.8±0.6 h,低剂量与中、高剂量的消除半衰期、表观分布容积、体内平均滞留时间的差异有统计学意义(P<0.05)。CL/F分别为44.5±14.7 L/h、44.6±11.3 L/h和52.5±7.7 L/h,低、中、高剂量的清除率相近,各剂量组间无统计学差异(P>0.05)；3.2.1.3贝那普利拉单次给药药动学参数及其在剂量间的差异单次口服1粒、2粒、3粒氨氯地平贝那普利胶囊后贝那普利的活性代谢产物贝那普利拉的Tmax分别为1.4±0.5 h、2.1±1.3 h和1.4±0.4h,Tmax各剂量组之间无统计学差异(P>0.05)；Cmax分别为232.60±100.46 ng·mL-1、323.48±61.58 ng·mL-1和615.91±188.23ng·mL-1,AUC0～24分别为1025.9±172.2 ng·h·mL-1、1924.8±314.4ng·h·mL-1和3095.0±713.4 ng·h·mL-1,AUC0-∞分别为1053.6±177.1ng·h·mL-1、1989.8±320.9 ng·h·mL-1和3150.0±715.6 ng·h·mL-1。贝那普利拉的Cmax、AUC与贝那普利的剂量呈线性相关,但其Cmax与贝那普利的剂量不成正比关系。t1/2分别为4.9±0.3 h、5.0±0.7 h和4.3±0.4 h；V/F分别为69.3±11.5 L、75.0±16.5 L和62.0±13.8 L；CL/F分别为9.7±1.6 L/h、10.3±1.4 L/h和9.9±2.0 L/h；MRT分别为7.8±1.5 h、8.7±1.4 h和7.3±1.1 h,低、中、高三种剂量的V/F、CL/F、MRT相近,差异无统计学意义(P>0.05)。3.2.2多次给药药动学参数及其在剂量间的差异3.2.2.1氨氯地平单次给药药动学参数及其在剂量间的差异连续多次口服氨氯地平贝那普利胶囊(每日早8点一次、每次2粒)14天后达到稳态,氨氯地平的Tmax为6.3±3.3 h；Cmax为24.00±5.58ng·mL-1,AUC0～144为1264.1±376.7 ng·h·mL-1,AUC0-∞为1343.8±405.6ng·h·mL-1；t1/2为33.6±10.9h；CL/F为23.0±6.5 L/h；V/F为1137.4±527.3L；Cmaxss为24.03±5.56 ng·mL-1；Cminss为15.64±3.93 ng·mL-1；Cav为19.32±5.05 ng·mL-1；DF为0.4±0.1。多次给药组和单次给药的中剂量组的Tmax、t1/2比较无统计学差异(P>0.05),CL/F、V/F、Cmax比较有统计学差异(P<0.05)。多次给药组AUC0～24ss(463.7±121.1 ng·h·mL-1)和单次中剂量组的AUC0～∞(304.2±54.9 ng·h·mL-1)比较有统计学差异(P<0.05)。多次服用氨氯地平贝那普利胶囊后氨氯地平存在蓄积现象。3.2.2.2贝那普利单次给药药动学参数及其在剂量间的差异多次连续口服2粒氨氯地平贝那普利胶囊后贝那普利的Tmax为0.47±0.16 h；Cmax为434.28±90.70 ng·mL-1,AUC0～8为504.2±118.2ng·h·mL-1,AUC0-∞为519.1±112.9 ng·h·mL-1；t1/2为2.30±1.02 h；CL/F为42.0±11.7 L/h；V/F为151.6±111.6L；Cmaxss为434.28±90.70 ng·mL-1；Cminss为3.95±1.40 ng·mL-1。Cav为21.0±4.9 ng·mL-1;DF为21.6±7.9。多次给药组和单次给药的中剂量组的Tmax、t1/2、CL/F、V/F、Cmax比较无统计学差异(P>0.05)。多次给药组AUC0～8ss (504.2±118.2 ng·h·mL-1)和单次中剂量组的AUC0-∞(477.2±130.8 ng·h·mL-1)比较无统计学差异(P>0.05)。多次服用氨氯地平贝那普利胶囊后贝那普利无蓄积现象。3.2.2.3贝那普利拉单次给药药动学参数及其在剂量间的差异多次连续口服2粒氨氯地平贝那普利胶囊后贝那普利代谢物贝那普利拉血药浓度达峰时间Tmax为1.6±0.4 h；Cmax为401.58±76.09ng·mL-1,AUC0～24为2338.9±326.3ng·h·mL-1,AUC0-∞为2412.3±329.3 ng·h·mL-1;t1/2为5.1±0.5 h; CL/F为8.7±1.3L/h; V/F为64.4±13.8L;Cmaxss为401.58±76.09 ng·mL-1；Cminss为9.35±1.90 ng·mL-1；Cav为97.45±13.59 ng·mL-1：DF为4.0±0.5。多次给药组和单次给药中剂量组的Tmax、t1/2、V/F比较无统计学差异(P>0.05),CL/F、Cmax比较有统计学差异(P<0.05)。多次给药组AUC0～24ss(2338.9±326.3 ng·h·mL-1)和单次中剂量组的AUC0～∞(1989.8±320.9 ng·h·mL-1)比较有统计学差异(P<0.05)。多次服用氨氯地平贝那普利胶囊后贝那普利拉有轻微蓄积现象。3.3安全性评价单次给药试验中无受试者出现不良反应现象。试验完成后受试者进行第二次体检,体检结果均无异常。多次给药试验中个别受试者在试验过程中出现不良反应现象。试验完成后,受试者进行第二次体检,体检结果均无异常。4结论4.1测定方法本实验方法可准确、快速测定氨氯地平、贝那普利及其活性代谢物贝那普利拉的血药浓度,用以研究单次给药药动学及多次给药的稳态药动学的考察。4.2药物动力学口服氨氯地平贝那普利胶囊后氨氯地平和贝那普利药物动力学在人体内的线性相关性不是很好,贝那普利拉在人体内呈现良好的线性药物动力学特征；多次给药后氨氯地平在人体内有明显的蓄积作用,贝那普利无蓄积作用,贝那普利拉有轻微蓄积作用。4.3安全性受试者口服氨氯地平贝那普利胶囊后耐受性、安全性良好。