近年来,科技的发展极大地提高了现代分析技术的水平,传统的样品前处理技术已难以满足高灵敏度、高选择性以及快速自动化的分析要求,如何获取高的萃取净化效果成为分析化学发展的重要课题。新型液相微萃取技术作为一种简便快捷,对环境友好,且成本低的前处理方法,在食品、环境、医药以及生物分析等各个领域中发挥越来越重要的作用。本文围绕新型液相微萃取技术结合高效液相色谱法在生物样品分析中的研究和应用展开一些工作,本文主要内容:1.基于漂浮有机液滴凝固液相微萃取对动物源性食品中糖皮质激素类药物残留进行检测目的:基于漂浮有机液滴凝固液相微萃取技术(SFOD-LPME)结合高效液相色谱法对动物源性食品中的糖皮质激素类药物残留进行分离和富集。方法:采用十一醇作为萃取剂,建立了对泼尼松、倍他米松、地塞米松和醋酸可的松四种糖皮质激素的SFOD-LPME的样品前处理方法,同时优化SFOD-LPME萃取过程,以得到最佳萃取条件。结果:经过优化选择得到的最佳SFOD-PLME萃取条件为:40μl十一醇(萃取剂),1200μl四氢呋喃(分散剂),样品溶液pH值等于7,体积为15 ml,NaCl加入量为4.0 g,在搅拌速度为2200 rpm的情况下萃取15 min,萃取温度设置为35℃。4种糖皮质激素类药物在1.2~200 ng/ml范围内线性良好(r~2≥0.9990),检测限为0.39~0.46 ng/ml(0.078-0.23μg/kg),富集倍数在142~276之间,加标回收率为81.5%-114.3%。结论:方法简便、灵敏、可靠,可用于动物源性食品中糖皮质激素类药物残留的检测。2.漂浮有机液滴凝固液相微萃取技术结合高效液相色谱法对多囊卵巢综合征患者尿液中雄性激素进行检测目的:运用漂浮有机液滴凝固液相微萃取技术结合高效液相色谱法对多囊卵巢综合征患者尿液中雄性激素进行检测。方法:尿液经β-葡萄糖醛酸酶酶解后,采用十一醇作为萃取剂,建立SFOD-LPME对人体尿液中睾酮、雄烯二酮、脱氢表雄酮和双氢睾酮四种雄性激素的萃取与分离,同时优化SFOD-LPME萃取过程,以确定最佳萃取条件。结果:最佳的萃取条件是:萃取溶剂为20μl十二醇、分散剂为200μl甲醇,供相溶液体积为8 ml、pH为7.0、盐的加入量为2.5 g。4中雄性激素在对应的浓度范围内的线性良好(睾酮、雄烯二酮、脱氢表雄酮的线性范围为5~200 ng/ml,双氢睾酮的线性范围为100~3000 ng/ml),相关系数r~2均大于0.9978,最低检测限为1.28~27.6 ng/ml,富集倍数在241~305之间。将该方法应用到实际尿样中进行测定,加标回收率为82.5%~112.4%。临床测定多囊卵巢患者尿样睾酮(38.5±22.1 ng/ml)、雄烯二酮(51.4±23.8 ng/ml)的平均水平显著高于健康对照组(P<0.05),差异具有统计学意义,脱氢表雄酮(9.08±2.40ng/ml)、双氢睾酮(496±30.4 ng/ml)的平均水平在组间无统计学差异(P>0.05)。结论:该法富集效果好、净化完全,有较好的重现性及可操作性。有望将该法应用到临床检测中,为多囊卵巢综合征患者的预防、诊断和预后提供参考价值。3.三相中空纤维溶剂棒液相微萃取结合高效液相色谱法测定人尿液中肌氨酸目的:建立三相中空纤维溶剂棒液相微萃取法(TPSB-LPME)结合高效液相色谱法对人体尿液中的肌氨酸进行萃取。方法:实验首先采用4-二甲胺偶氮苯磺酰氯为衍生剂对肌氨酸进行衍生,而后通过TPSB-LPME进行富集与净化,同时优化了萃取过程,以确定最佳的TPSB-LPME萃取条件。结果:最佳的萃取条件为:分别使用甲苯与200μl四氢呋喃作为萃取剂与分散剂,供相pH为2.0,接收相为40μl碳酸钠缓冲溶液(pH=10.20),盐的加入量为0.5 g,在35℃条件下萃取35 min,搅拌速度设为840 rpm。方法在肌氨酸浓度为0.05至25μmol/l范围内线性良好,r~2=0.9990,检测限(LOD)为0.026μmol/l,回收率范围90.5%~93.6%,富集倍数达到168倍。临床测定前列腺癌患者尿样肌氨酸水平(7.07-14.3μmol/l)显著高于健康志愿者(2.11-4.51μmol/l)(P<0.01),差异有统计学意义。结论:成功建立一种简便、环保的方法对人尿液肌氨酸进行含量测定,为尿液肌氨酸检测提供一个可靠的技术平台,同时为肌氨酸作为前列腺癌潜在标记物的可能性提供临床数据支持。