目的：研究高迁移率族蛋白1对内皮细胞(ECs)通透性的影响并初步探讨其作用机制。 方法：①体外培养人内皮细胞系(EA.hy926)，镜下观察EA.hy926细胞形态特征，免疫荧光方法测定EA.hy926胞浆VIII因子表达，流式细胞术测定细胞膜表面晚期糖基化终产物受体(RAGE)的表达。②不同剂量的高迁移率族蛋白1(HMGB1)以及100ng/ml的HMGB1于不同时间点刺激ECs(ECs)，采用Transwellchamber弥散模型，以荧光光谱仪测定异硫氰酸荧光素(FITC)标记的葡聚糖( Dextran)透过Transwell小室的荧光强度，表示人血管ECs单细胞层的通透性大小。③HMGB1刺激ECs，激光共聚焦显微镜观察ECs骨架肌动蛋白(F-actin)、紧密连接蛋白(ZO-1)和黏附连接蛋白(VE-cadherin)的形态分布以及蛋白免疫印迹法检测ZO-1和VE-cadherin蛋白的表达。④Pull-down法检测HMGB1诱导的Rho-GTP的活性表达；细胞免疫组化法、免疫印迹和免疫荧光法分别检测HMGB1诱导的RhoA蛋白、肌球蛋白轻链磷酸化(P-MLC)表达以及Rho激酶( ROCK)特异性抑制剂Y27632、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)特异性抑制剂ML-9干预后P-MLC表达的变化；激光共聚焦显微镜观察在抑制剂C3-转移酶、Y27632、ML-9干预后F-actin、ZO-1和VE-cadherin的形态分布变化、荧光光谱仪测定ECs通透性的变化以及免疫印迹法测定ZO-1和VE-cadherin蛋白表达水平的变化； 结果：⑴显微镜下EA. hy926细胞呈椭圆形或梭形，铺路石状镶嵌排列，胞浆表达VIII因子呈强阳性，具有典型的ECs特征；流式细胞仪测定EA.hy926细胞膜上RAGE表达随HMGB1的剂量增大而增高。⑵与对照组相比，HMGB1显著诱导ECs通透性增高(P<0.05)，且ECs通透性随HMGB1剂量增大或作用时间延长而增高：HMGB1100ng/ml作用12h(P<0.05)，作用24h(P<0.01)；150ng/ml作用12h(P<0.01)，作用24h(P<0.001)。⑶相比较于对照组，HMGB1诱导F-actin发生重组，产生张力纤维丝，细胞间裂隙(gaps)形成增多；ZO-1分布不规则，荧光强度减弱，部分密闭环开放；VE-cadherin排列紊乱、失去连续性、片段化分布于细胞边界；上述损伤性变化随着HMGB1作用时间或剂量增大而加重。而且，HMGB1诱导ZO-1和VE-cadherin蛋白表达明显减少而且具有时间效应。⑷HMGB1快速诱导Rho蛋白的激活，MLC的磷酸化水平显著增高，C3-转移酶和Y27632能够明显降低MLC的磷酸化水平，抑制ECs F-actin的解聚和重排，部分恢复ZO-1和VE-cadherin的正常形态分布及其蛋白表达水平，抑制ECs通透性增高。而MLCK特异性抑制剂ML-9则不能抑制MLC的磷酸化水平，也对HMGB1诱导的ECs F-actin重组和内皮通透性增高无明显抑制作用。 结论：HMGB1通过诱导F-actin重组、ZO-1和VE-cadherin结构改变及表达变化，导致ECs收缩、细胞间裂隙形成，引发ECs通透性增高，其机制之一是通过Rho/ROCK信号通路发生作用，通过抑制其活性可减轻内皮屏障损伤及改善其通透性。