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目的:本课题旨在研究神经嵴干细胞来源的黑色素细胞前体发育的分子机制,探讨哪些因子在其发育过程中发挥作用。
方法:利用免疫荧光检测的方法,找出神经嵴来源的黑色素细胞前体出现的时间;采用原代小鼠胚胎神经管外植法技术对小鼠胚胎神经管进行体外培养,通过移除神经管和替换神经管两种办法以检测神经管对黑色素细胞前体发育的影响;通过基因芯片的方法找出Mitf基因敲除型小鼠神经管所分泌的多种生长因子;并参考文献资料后,通过体外培养小鼠胚胎神经管24h后移除神经管,加入生长因子诱导分化黑色素细胞前体的办法以检测基因芯片中几种可能的生长因子在诱导神经嵴干细胞定向分化成黑色素细胞前体过程中的作用,通过免疫荧光的方法对黑色素细胞前体进行标记,并计数比较,进行统计学分析。
结果:B6野生型小鼠10.5天胚胎神经管背侧开始有黑色素细胞前体出现;保留神经管的神经嵴干细胞中有较多黑色素细胞前体出现,而移除神经管后的神经嵴干细胞中检测不到MITF蛋白表达的细胞;当Mitf基因敲除型小鼠神经管存在于B6野生型小鼠神经嵴干细胞中,神经嵴干细胞能够分化成黑色素细胞前体;Kit1,EDN3,Wnt3a对于表达MITF蛋白的黑色素细胞前体的产生是必需的。
结论:神经嵴来源的黑色素细胞前体在小鼠10.5天胚胎神经管背侧开始出现;神经管在神经嵴干细胞分化成黑色素细胞前体的发育过程中起着极其重要的作用,为神经嵴干细胞定向分化成黑色素细胞前体所必需;Kit1,EDN3,Wnt3a三种生长因子在神经嵴来源的黑色素细胞前体的发育中扮演着重要作用。