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目的p53是迄今为止发现的突变率最高、涉及范围最广的抑癌基因之一,在肝细胞癌(以下简称肝癌)的动物模型中也发现,细胞癌变的早期即伴有p53功能缺失或突变。二乙基亚硝胺(DEN)是一种强致癌剂,特别是对于肝脏,有很高的致癌率,并且其诱导的动物肝癌模型与人类肝癌的产生过程很相似,因此常被用作肝癌动物模型的诱癌剂。本实验即研究p53功能缺失对DEN诱导肝细胞恶变过程的影响,从而进一步明确p53功能缺失和细胞恶变之间的关系,探讨肝癌发生的机制。方法由于转录因子AP-1与肝癌的发生有较密切的关系,我们以AP-1作为观察指标。实验中首先利用p53特异的抑制剂pifithrin-α和小RNA干扰技术抑制其功能,随后再观察DEN对正常肝细胞AP-1转录活性的影响,并且与不抑制p53功能的对照组做比较,从而探讨p53在DEN诱导的肝细胞癌变激发阶段的作用;因为AP-1的活化和MAPK信号转导通路有密切的关系,随后的实验中我们利用MAPK信号转导通路的抑制剂和Western blot技术来判断究竟是哪些信号转导通路参与了p53功能缺失时DEN诱导的L02细胞AP-1的活化。结果实验发现p53功能缺失可以显著提高二乙基亚硝胺诱导的AP-1的转录活性,并且表现出剂量和时间的双重依赖性;而二乙基亚硝胺对正常肝细胞AP-1的转录活性无明显作用,却可以显著上调正常肝细胞p53的活性;使用各种抑制剂的实验组发现JNKs的抑制剂SP600125可以显著的抑制二乙基亚硝胺诱导的p53功能缺失细胞的AP-1的活化,并且其抑制作用和用量呈相关,而ERKs和p38的抑制剂却无明显作用;Western blot亦从蛋白水平证实二乙基亚硝胺诱导p53功能缺失细胞的AP-1的活化是通过JNKs信号转导通路,而与ERKs和p38无明显相关。结论一、p53功能缺失可以显著促进二乙基亚硝胺诱导的肝细胞L02的AP-1转录活性的上调;二、p53可能是正常肝细胞的重要抗肿瘤机制;三、信号转导分子JNKs参与了p53功能缺失时二乙基亚硝胺诱导的肝细胞L02的AP-1转录活性的上调,而与ERKs和p38无明显关系。