温室种植甘蓝型油菜小孢子培养技术研究

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单倍体育种作为一种高效育种方法,在油菜育种中已越来越受到关注。在油菜单倍体产生的各种途径中,花粉培养(也称小孢子培养)是目前获取单倍体最有效、最广泛应用的方法。但是,目前我国(半)冬性油菜小孢子培养的低胚状体诱导频率、低染色体加倍率限制了该技术在我国油菜遗传育种和基础研究中的进一步应用。为了建立油菜小孢子培养的高效技术体系,对温室生长甘蓝型油菜小孢子培养条件进行了优化试验、研究了栽培条件对小孢子培养的影响、考查了低温处理小孢子培养物对油菜小孢子植株染色体加倍的效果。试验得到以下结果:1、温室生长的油菜在进行小孢子培养时,不同的培养条件对产胚率和有效胚率都有明显的影响,取材部位从主枝、一次分枝和二次分枝取材进行小孢子培养均可获得胚状体,但产胚率和有效胚率以主枝和一次分枝较高;花粉密度在0.5~3.0蕾花粉/ml范围内都可诱导产生胚状体,以1.0蕾花粉/ml时最高;热激温度以32℃热激3天的产胚率和有效胚率较高。2、为拉长花期,可以采取分期在温室里播种的方式,9月、10月和11月播种均能得到有效胚。但是,随着时间的延后,出胚率有所下降。3、从温室取材进行小孢子培养不容易污染,在一定时间内重复取材培养成功率高,产胚率和有效胚率均比从大田取材的高得多。4、不同的施肥水平对小孢子培养有明显的影响。试验结果,在温室环境条件下,以硼砂0.34g做基肥一次施入,其它肥料按尿素0.27g、KCl 0.27g和CaCl2 0.34g每周施一次肥,小孢子培养效果最好。5、小孢子在32℃下热激培养7天以后转入到4℃的条件下处理5天或者7天能使小孢子植株高频率地二倍化,但与常用的秋水仙碱加倍处理相比有待进一步的优化,主要问题有二,一是还存在一定的嵌合体现象,二是加倍效率不如秋水仙碱。
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