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目的:建立再生障碍性贫血BMMSC+淋巴细胞的细胞模型,观察穿龙薯蓣皂苷在离体水平对Th17/Treg细胞数量/比例的调节及Hippo通路在其中的调节作用,为临床治疗再生障碍性贫血(AA)提供细胞模型,并探讨再障发生的机制。方法:1.建立再障BMMSC+淋巴细胞的细胞模型,研究穿龙薯蓣皂苷干预后对Th17/Treg细胞数量比例和功能的影响。采用流式细胞术(FCM)检测Th17、Treg细胞数量在CD4~+T细胞的百分比,Q-PCR检测STAT3mRNA、FOXP3 mRNA含量,ELISA法检测IL-2、IL-6、IL-10、IL-17等相关指标。2.穿龙薯蓣皂苷在体外对HIPPO通路相关蛋白的影响,采用Westernblot法检测YAP、MST1、LATS2蛋白的表达水平,QPCR法检测YAPmRNA、LATS2mRNA、MST1 mRNA含量的表达。结果:1.穿龙薯蓣皂苷对再障BMMSC+淋巴细胞对T细胞数量/比值及功能的影响(1)与对照组相比,模型组BMMSC+淋巴细胞共培养血清中IL-2、IL-6、IL-17的含量显著增加(P<0.01),IL-10、TGF-β的含量显著减少(P<0.01)。给予环孢素以及穿龙薯蓣皂苷干预之后,与模型组相比IL-2、IL-6、IL-17的含量显著减少(P<0.01),与模型组对比IL-10、TGF-β的含量显著增加(P<0.01)。与模型组相比,穿龙薯蓣皂苷组、环孢素组的Th17细胞占CD4~+T细胞比率显著减少(P<0.01),Treg占CD4~+T细胞比率显著增多,Th17/Treg细胞的比值显著减小(P<0.01),穿龙薯蓣皂苷组与环孢素组对比,Th17细胞占CD4~+T细胞比值显著减少(P<0.01),Treg细胞占CD4~+T细胞比值显著增多(P<0.01)2.穿龙薯蓣皂苷对体外模拟骨髓微环境(BMMSC+淋巴细胞)内HIPPO通路相关蛋白的影响(1)与对照组相比,模型组的YAPmRNA表达水平明显下降(P<0.01);给予环孢素以及穿龙薯蓣皂苷干预之后,YAPmRNA、LATS2mRNA表达水平较模型组相比均有不同程度的下降(P<0.01)。与对照组相比,MST1mRNA在模型组的表达水平显著升高(P<0.01)。给予环孢素以及穿龙薯蓣皂苷干预之后,MST1mRNA的表达水平较模型组相比均有不同程度的上升(P<0.01)(2)与对照组相比,模型组的LATS2、YAP的蛋白表达水平升高(P<0.05),模型组的MST1的蛋白水平降低(P<0.05)。模型组给予环孢素与穿龙薯蓣皂苷之后,YAP、LATS2蛋白的表达水平降低(P<0.05),MST1蛋白的表达水平升高(P<0.05)。(3)穿龙薯蓣皂苷组与环孢素组之间相比较,MST1mRNA、LATS2mRNA、YAPmRNA与其对应的蛋白无明显统计学差异(P>0.05),FOXP3mRNA、STATmRNA之间无明显的统计学差别。结论:穿龙薯蓣皂苷能够在体外水平改善再障BMMSC+淋巴细胞导致的Th17/Treg的失衡,增加Treg数量,减少Th17的数量。调节Hippo通路关键节点MST1、YAP、LATS2的表达,上调MST1蛋白及MST1mRNA表达和IL-10、TGF-β的表达,下调LATS2mRNA、YAPmRNA及蛋白的表达和IL-6、IL-17的表达,增加MST1和FOXP3 mRNA的表达以及降低YAP、LATS2、STAT3mRNA的表达,提高Treg的数量,减少Th17的数量,诱导CD4~+T细胞向Treg细胞的分化,减少向Th17的分化,最终达到恢复Th17/Treg平衡的作用。