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[目的]:
从海南生产的海水钝顶螺旋藻中提取多糖,并研究其对环磷酰胺所致免疫低下小鼠免疫功能的影响,及其对慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞免疫功能的影响,探讨其在生物医药领域中应用可能性,为进一步深入研究钝顶螺旋藻多糖的功能和应用提供理论及实验依据。
[方法]:
采用改良的三氯乙酸法提取海水钝顶螺旋藻多糖。用红外光谱法测定钝顶螺旋藻多糖分子结构。用环磷酰胺腹腔注射法建立免疫功能低下小鼠的模型,再分别给予2mg/ml、4mg/ml和8mg/ml钝顶螺旋藻多糖,运用MTT法和比色法检测各组小鼠脾细胞、胸腺细胞增殖能力和小鼠巨噬细胞吞噬功能、分泌IL-1功能。用流式细胞术和 ELISA 法分别检测细胞周期变化和小鼠脾细胞培养上清 IFN-γ浓度变化;采用Greiss法检测各组小鼠巨噬细胞分泌NO功能。运用MTT法和流式细胞术分别测定钝顶螺旋藻多糖对慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞增殖能力和细胞周期的影响,采用ELISA 法检测外周血单个核细胞培养上清细胞因子IFN-γ、IL-2和IL-4浓度,同时用RT-PCR法检测外周血单个核细胞IFN-γmRNA的表达。
[结果]:
1.得到灰白色粉末状海水钝顶螺旋藻多糖,多糖含量92.62%。红外光谱显示钝顶螺旋藻多糖的糖苷键为仅α-构型,具有吡喃型糖环。
2.12.5μg/ml~1000μg/ml钝顶螺旋藻多糖能够增强ConA或LPS诱导的小鼠脾细胞增殖和巨噬细胞吞噬功能,且呈剂量-效应关系。
3.模型对照组小鼠脾细胞和胸腺细胞增殖明显低于正常对照组,脾细胞和胸腺细胞细胞周期与正常对照组相比发生G0/G1期阻滞,2mg/ml、4mg/ml 和8mg/ml钝顶螺旋藻多糖能显著提高环磷酰胺所致免疫低下小鼠脾细胞和胸腺细胞的增殖能力,使脾细胞和胸腺细胞细胞周期发生S期和G2/M 期转换。
4.模型对照组小鼠巨噬细胞吞噬功能、分泌IL-1和NO浓度明显低于正常对照组,2mg/m、4mg/m和8mg/m钝顶螺旋藻多糖能显著提高环磷酰胺所致免疫低下小鼠巨噬细胞的免疫功能。
5.模型对照组小鼠脾细胞分泌IFN-γ浓度明显低于正常对照组,2mg/ml、4mg/ml和8mg/ml钝顶螺旋藻多糖能显著提高环磷酰胺所致免疫低下小鼠脾细胞分泌IFN-γ。
6.12.5μg/ml~1000μg/ml钝项螺旋藻多糖能显著增强慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞的增殖能力,并使其细胞周期发生S期和G2/M期转换。
7.钝顶螺旋藻多糖能显著增强慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞分泌细胞因子IFN-γ和IL-2,且能显著降低慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞分泌细胞因子IL-4。
8.100μg/ml、200μg/ml和400μg/ml钝顶螺旋藻多糖能显著上调慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞IFN-γ mRNA的表达。
[结论]:
从海水钝顶螺旋藻中成功分离得到具有免疫活性的钝顶螺旋藻多糖,该多糖能够提高环磷酰胺所致免疫低下小鼠的免疫功能,对慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞的免疫功能具有调节作用。