【摘 要】
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里氏木霉 RutC-30 以乳糖和槐豆胶为诱导物,用 10 升发酵罐液态发酵生产β-甘露聚糖酶,发酵液经两次硫酸铵分级分离和两次聚丙烯酰胺凝胶制备电泳纯化,得到纯度均一的酶制品,
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里氏木霉 RutC-30 以乳糖和槐豆胶为诱导物,用 10 升发酵罐液态发酵生产β-甘露聚糖酶,发酵液经两次硫酸铵分级分离和两次聚丙烯酰胺凝胶制备电泳纯化,得到纯度均一的酶制品,SDS-PAGE 鉴定该酶的分子量为 53KD。以纯化的 ?-甘露聚糖酶为抗原免疫雌性 Balb/c 小鼠, 取免疫小鼠的脾细胞与处在对数生长期的 SP2/0 骨髓瘤细胞在浓度为 50%的聚乙烯二醇(PEG)的作用下融合, 经 HAT 培养基选择性培养,间接 ELISA 法筛选阳性杂交瘤,获得了一株高特异性分泌抗 ?-甘露聚糖酶单克隆抗体的杂交瘤细胞。通过小鼠腹腔注射杂交瘤,收集腹水,经硫酸铵盐析初步纯化,得到高效价的抗 ?-甘露聚糖酶单抗。 同时用 ?-甘露聚糖酶免疫雄性家兔, 制备多克隆抗体,建立检测转 ?-甘露聚糖酶基因大肠杆菌表达产物的 ELISA 双抗夹心法,为检测转 ?-甘露聚糖酶基因大肠杆菌在猪肠道中的表达建立了方法学。
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