论文部分内容阅读
目的观察骨形成蛋白-7(BMP-7)基因修饰的骨髓间充质干细胞(MSCs)对肾缺血再灌注损伤修复的影响,明确体内BMP-7对MSCs向肾细胞定向分化的影响。方法密度梯度离心法分离纯化大鼠MSCs。慢病毒介导BMP-7基因体外转染大鼠MSCs。PCR法检测BMP7-MSCs细胞上清BMP-7 mRNA的表达。建立大鼠肾脏缺血再灌注损伤(IRI)模型,通过下腔静脉注射将BMP7-MSCs移植入大鼠肾IRI模型,同时设立对照组。分别于细胞移植术后第3、5、7、30d取大鼠双侧肾检测各项指标(取肾前4h予腹腔注射BrdU,50mg/kg):BrdU免疫组织化学染色检测细胞分裂活跃程度;上皮钙粘蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、a-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)的免疫组织化学染色检测分析细胞的类型;胶原纤维染色检测分析肾脏纤维化情况;绿色荧光蛋白的荧光显微镜检测分析细胞是否来源于供体; PCR检测分析波形蛋白、a-平滑肌肌动蛋白、BMP-7蛋白、上皮钙粘蛋白表达量。结果1密度梯度离心法成功分离纯化大鼠MSCs。2 BMP-7修饰的重组MSCs构建成功,重组MSCs表达BMP-7。3 160例肾缺血再灌注损伤大鼠模型建立成功。4与对照组相比较,MSCs移植组在缺血再灌注肾损伤早期的Scr和BUN下降得更快(P<0.05)5与MSCs移植组比较,BMP7-MSCs移植组对大鼠缺血再灌注肾损伤早期Scr和BUN的升高的抑制作用更显著(P<0.05)。6与对照组相比,MSCs移植组的BrdU阳性细胞个数明显增多,两者差异有统计学意义(P<0.05)7与MSCs移植组相比, BMP7-MSCs移植组的BrdU阳性细胞个数明显增多,两者差异有统计学意义(P<0.05)。8.与MSCs移植组相比,BMP7-MSCs移植组的E-cadherin+/GFP+阳性细胞个数明显增多,两者差异有统计学意义(P<0.05)。9与对照组相比,MSCs移植组大鼠E-cadherin的mRNA明显增多,两者差异有统计学意义(P<0.05)。10与MSCs移植组相比,BMP7-MSCs移植组大鼠E-cadherin的mRNA明显增多,两者差异具有统计学意义(P<0.05)。11与空白对照组相比,MSCs移植组α-SMA的表达更低,两者差异有统计学意义(P<0.05)。12与MSCs移植组相比,BMP7-MSCs移植组α-SMA的表达更低,两者差异有统计学意义(P<0.05)。13与空白对照组相比,MSCs移植组Vimentin的表达更低,两者差异有统计学意义(P<0.05)。14与MSCs移植组相比,BMP7-MSCs移植组Vimentin的表达更低,差异有统计学意义(P<0.05)。15与对照组相比,MSCs移植组大鼠BMP-7的mRNA明显增多,两者差异有统计学意义(P<0.05)。16与MSCs移植组相比,BMP7-MSCs移植组大鼠BMP-7的mRNA明显增多,两者差异具有统计学意义(P<0.05)。结论密度梯度离心法能成功地分离纯化大鼠MSCs。通过慢病毒载体能成功高效地将BMP-7转染MSCs。外源MSCs和BMP7-MSCs对大鼠缺血再灌注肾损伤早期Scr和BUN的升高具有一定的抑制作用,能够促进缺血再灌注后肾损伤的肾脏细胞的增殖,能够定向分化为肾小管细胞而修复肾损伤,能够减轻肾IRI后肾间质纤维化程度;BMP7能够促进MSCs对肾损伤的修复。