何首乌为蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb.的干燥块根，临床应用上有生首乌和制首乌之别。传统中医认为，生何首乌性平，味苦涩，微甘，具有解毒消痈，润肠通便的功效，主治凛病疮痈，风疹瘤痒，肠燥便秘；制何首乌性温，味甘，入肝，肾经，具有补肝肾，益精血，乌须发，强盘骨的功效，主治血虚萎黄，眩晕耳呜，须发早白，腰膝酸软，肢体麻木，崩漏带下，久虐体虚，高脂血症等。经常食用何首乌，对神经衰弱、白发、脱发、贫血等病症有一定的治疗作用。何首乌还有强壮神经的作用，可健脑益智，能够促进血细胞的成长和发育，有显著的抗衰老作用。经常食用何首乌，对神经衰弱、白发、脱发、贫血等病症有一定的治疗作用。何首乌还有强壮神经的作用，可健脑益智，能够促进血细胞的生长和发育，有显著的抗衰老作用。何首乌中的主要化学成分为二苯乙烯苷类、蒽醌类及磷酯类，二苯乙苷是何首乌中含量较高的一类成分，活性明确，蒽醌类成分具有降低胆固醇、降血糖、抗病毒、强心，促进胃肠蠕动等作用；卵磷脂类成分耐热性，抗菌性均较差。中药生产过程一般提取、纯化、浓缩、干燥等步骤，在这些操作过程中二苯乙烯苷类物质易在发生聚合，水解，氧化。结合蒽醌易转化为游离蒽醌，最终使何首乌药效下降甚至产生毒性。因此，有必要探明何首乌中的二苯乙烯苷类，蒽醌类，磷脂类等成分在工艺制备过程中的动态变化规律，以及化学成分的动态变化与药效之间的相关性。本文以中药何首乌饮片为研究对象，采用生产中常用的提取、纯化、浓缩、干燥等技术对何首乌饮片进行处理，制备不同工艺何首乌样品，同时优化各制备工艺的最佳参数，构建何首乌化学成分特征图谱，考察不同制备工艺过程中主要化学成分的动态变化规律。通过LC-MS-MS初步鉴定何首乌特征图谱中各化学成分。同时建立高脂血症小鼠模型，进行降血脂、抗氧化的药效学试验，获得特征图谱的量化特征和药效学数据。在此基础上，采用灰关联分析方法进行分析，寻找何首乌化学成分与降血脂、抗氧化药效之间的对应关系。　　本研究主要内容包括：⑴选择符合药典标准的何首乌饮片，以二苯乙烯苷转移率为评价指标，优选何首乌提取、纯化、浓缩、干燥等制备工艺的最佳参数。并按各制备工艺的最佳参数制备何首乌样品。水提工艺优选结果显示：加水量和提取次数对二苯乙烯苷转移率存在显著性影响。各因素对二苯乙烯苷转移率影响大小顺序依次为：加水量>提取次数>回流时间>浸泡时间。加水量越大，提取次数越多，二苯乙烯苷的转移率越高，结合成本因素，确定其最佳工艺为：取何首乌饮片适量，加12倍量水提取两次，每次1小时。醇提工艺优选结果显示：乙醇浓度和回流时间对二苯乙烯苷转移率存在显著性差异。各因素对二苯乙烯苷转移率影响大小顺序依次为：乙醇浓度>回流时间>加醇量>提取次数。乙醇浓度越高，回流时间越长，二苯乙烯苷的转移率越高，乙醇用量和提取次数对二苯乙烯苷转移率影响不明显。根据分析结果得出何首乌最佳醇提工艺为：取何首乌药材适量，加10倍量80%乙醇，提取两次，每次1h。生物酶酶解提取结果显示：无论以哪种酶进行酶解提取，与空白对照组相比，提取液中二苯乙烯苷含量均明显下降，采用果胶酶下降最明显，加入0.4%的酶进行酶解时，二苯乙烯苷的提取效率降低了53.9％，提示此时二苯乙烯苷有较大损失，但酶的用量与二苯乙烯苷转移率结果规律性不明显。酶解提取效果不好的原因可能是加入的缓冲液使二苯乙烯苷分解，或加入的生物酶分解了何首乌的提取液中的淀粉成份，使提取液黏度增大，从而影响有效成份的溶出。从何首乌酶提实验的初步探索中可得出，对何首乌进行生物酶提取时应谨慎选择。半仿生提取结果显示：提取时间对二苯乙烯苷转移率影响最大，其次为第一次提取液pH值，第二次提取液pH值影响最小，提取时间超过2h后，提取液中二苯乙烯苷含量反而降低，所以最优提取时间为2h；何首乌在偏弱碱的环境中溶出率增加，这与何首乌中二苯乙烯苷的性质有关，二苯乙烯苷含较多的酚羟基，显弱酸性，在碱性环境中易于溶出，同时二苯乙烯苷为酚苷，在强碱中易为碱催化水解，溶出率减少。确定何首乌的最佳半仿生提取工艺为：取何首乌饮片适量，加12倍量水，加热回流提取两次，每次2h，第一煎液用稀HCl调节pH值至6，第二煎液用NaOH调节pH值至10。⑵最佳水提醇沉工艺为：取何首乌水提液，浓缩至料液比为1:2，加入80%乙醇，醇沉至醇浓度为60%。静置12h，滤过。水提醇沉操作能明显降低何首乌的出膏率，但易造成二苯乙烯苷成分损失，各实验中二苯乙烯苷的转移率普遍不高。大孔吸附树脂筛选结果显示：选用中等极性的LSA-21型树脂进行纯化，效率最高。因此，选择该型号树脂进行动态吸附实验考察，确定其最佳动态吸附工艺为：取LSA-21树脂10g，上柱，分别加入0.2g/ml（相当于生药量）何首乌上样液60ml进行动态交换吸附，吸附流速为1.0ml/min，收集流出液，待吸附完全后加水洗至流出液接近无色后，加60%乙醇60ml洗脱，调节流速1.0ml/min，收集洗脱液。验证实验证明，LSA-21树脂对何首乌二苯乙烯苷的动态吸附率、解吸率均在80%以上，纯化效果良好。纯化后二苯乙烯苷在干膏中的含量由7.3%提高至43.5%。⑶中药生产中，提取液的浓缩与干燥是必不可少的环节，但操作时往往需要加热，易造成有效成分转移率下降，本实验对何首乌的浓缩及干燥工艺分别进行了考察。根据二苯乙烯苷及结合蒽醌的转移率测定数据，将提取液于80℃时浓缩至相对密度为1.15时二苯乙烯苷，结合蒽醌转移率最高。实验过程中对浓缩液分别进行了冷冻干燥、真空干燥、喷雾干燥考察。结果显示，何首乌浓缩液经喷雾干燥得到的干燥品水溶性较好，但二苯乙烯苷转移率不高，加入3%β-环糊精后，转移率得到一定程度提高，原因可能是喷雾干燥操作过程温度较高，易造成二苯乙烯苷成分分解，另外，实验时采用的喷雾干燥为小型设备，许多的干燥品粘附在器壁上难以收集完全也是原因之一。冷冻干燥得到的干燥品二苯乙烯苷及结合蒽醌转移率均较高，但干燥所需时间长，且干燥品水溶性差，不适宜制成配方颗粒。⑷优选出各制备工艺的最佳参数后，分别按最佳工艺制得何首乌样品，分别为ST、CT、STCC、STSZ、STPW、CTPW、BFS、MJ、HDPZ，共计9个具有代表性的样品。相似度计算结果表明：HDPZ与STSZ组与其他各组图谱差异较大，提示这两种制备工艺中对成分产生较大影响。传统的水提，醇提等工艺则对化学成分变化影响较小。采用液相色谱-质谱（LC-MS-MS）联用技术分析了何首乌特征图谱中的化学成分，结果显示，何首乌特征图谱中主要成分包括：2,3,5,4-四羟基二苯乙烯2-O-β-D-葡萄糖苷，大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷，大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、2,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-O-(6″-O-乙酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷以及大黄素、大黄素甲醚、大黄酚等游离蒽醌类物质。根据成分类型，何首乌特征图谱可以分为3个区域，A区主要为强极性物质，且与炮制关联较大，B区主要为二苯乙烯苷及蒽醌苷类成分，C区主要为游离蒽醌类成分。实验结果表明，何首乌各样品中，喷雾干燥和树脂纯化对2,3,5,4-四羟基二苯乙烯2-O-β-D-葡萄糖苷的转移率影响较大，提示这两种制备过程易造成成分的损失，采用大孔树脂纯化影响次之，其余几个因素影响相同。