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在临床实践中,由于缺乏有效的检测手段对胃癌进行早期诊断,当患者被诊断出胃癌时,肿瘤多处于进展期或已发生远处转移,严重影响了胃癌患者的预后。因此,发现肿瘤早期诊断的分子标志物显得越来越重要,且对胃癌转移的相关机制研究刻不容缓。最近研究发现,长链非编码RNA(lncRNA),在许多肿瘤中均有报道,可以作为新的一类肿瘤诊断的分子标志物。在我们的研究中,目的是探究lncRNAs能否作为诊断标志物来区分肿瘤患者及正常人。我们对两组胃癌组织及配对的癌旁组织进行芯片分析,从中挑选出9条与肿瘤相关的lncRNA,并用实时荧光定量PCR检测lncRNAs在胃组织及血浆中的相对表达量。我们检测了49例配对的胃组织,构建了一个5-lncRNA组合,AK001058、INHBA-AS1、MIR4435-2HG、CEBPA-AS1和UCA1,并作受试工作曲线(ROC)分析,其曲线下面积(AUC)为0.975。并在血浆中检测上述5条lncRNA的表达量。51例胃癌患者血浆及53例正常人血浆作为训练组,47例胃癌患者血浆及51例正常人血浆作为验证组。在训练组与验证组中,4-lncRNA组合,包括AK001058、INHBA-AS1、MIR4435-2HG和CEBPA-AS1,其AUC分别为0.921及0.902,且在训练组中,从检测的5条lncRNA中随机挑选4条、3条及2条lncRNA组合,作ROC曲线分析,上述4-lncRNA组合的AUC值高于5-lncRNA及其他任意4-lncRNA、3-lncRNA、2-lncRNA及单一lncRNA的AUC值。在验证组血浆中,上述的4条lncRNA在胃癌患者血浆中水平上调,从检测的4 lncRNAs组合中,随机3条及2条lncRNA组合,做ROC曲线分析,4-lncRNA组合的AUC值明显大于3-lncRNA、2-lncRNA及单一lncRNA的AUC值。同时我们分析了上述lncRNA在胃癌组织及血浆中的表达水平与胃癌患者及肿瘤临床资料之间的关系。在胃癌组织中,INHBA-AS1、MIR4435-2HG、CEBPA-AS1和AK00108表达水平与胃癌分化程度密切相关,AK001058在淋巴结转移的胃癌组织中较高表达,且UCA1在早期胃癌中的表达水平明显高于进展期胃癌的表达水平。对于胃癌血浆,INHBA-AS1的表达水平与胃癌的分化程度及肿瘤大小密切相关,肿瘤侵袭越深且处于进展期的胃癌,AK001058的表达水平越高。经过组织验证,INHBA-AS1、CEBPA-AS1与其相关的蛋白质编码基因在胃癌组织中的表达水平存在正相关。同时,我们检测了lncRNA MIR4435-2HG不同片段在血浆中的表达量,不同的RNA片段在血浆中含量不同,且同一片段在胃癌患者血浆及正常人血浆中不同,但大部分片段在胃癌患者血浆中的含量高于正常人血浆中的含量。通过研究,我们的结果显示,AK001058、INHBA-AS1、MIR4435-2HG和CEBPA-AS1在胃癌组织及胃癌患者血浆中均表达上调,该4条lncRNA组合可作为胃癌诊断的肿瘤分子标志物。我们也在胃癌中研究了其中一类lncRNA,其转录方向与相关蛋白编码基因的转录方向相反,称为反义RNA,其表达异常与人类肿瘤形成密切相关,但在肿瘤中的功能及相关机制并未被研究清楚。在我们研究中,目的是研究反义RNA对胃癌的形成及转移相关机制。用实时定量PCR的方法,我们检测反义长链非编码RNA ZEB1-AS1在49例配对胃组织,88例胃癌患者血浆及77例年龄、性别匹配的正常人血浆中的表达,发现ZEB1-AS1在胃癌组织及胃癌患者血浆中的表达水平均上调,并对ZEB1-AS1在胃组织及血浆中的表达水平作受试工作曲线(ROC),其曲线下面积(AUC)分别为0.898和0.750。对胃癌组织及血浆中ZEB1-AS1的表达水平与胃癌患者及肿瘤相关临床资料进行分析,发现ZEB1-AS1的表达水平与胃癌的淋巴结转移密切相关,高水平ZEB1-AS1可以促进胃癌的淋巴结转移。胃癌患者血浆中ZEB1-AS1的表达水平显示,胃癌的分化程度越低,ZEB1-AS1在胃癌血浆中的表达水平越高。我们进一步研究ZEB1-AS1在胃癌细胞中的功能,上调ZEB1-AS1促进胃癌细胞的侵袭转移,且ZEB1-AS1促进胃癌细胞的EMT进程是通过上调c-met蛋白水平及ERK1/2蛋白质磷酸化水平发挥作用的。该研究结果表明,ZEB1-AS1作为癌基因可以调控胃癌细胞的侵袭转移进程,ZEB1-AS1可作为胃癌的诊断标志物及治疗的靶点。取得的主要进展:1.胃组织芯片分析长链非编码RNA在胃癌组织中存在异常表达。2.q RT-PCR方法检测长链非编码RNA INHBA-AS1、MIR4435-2HG、CEBPA-AS1和AK001058在胃癌组织及血浆中高表达,可作为胃癌诊断的分子标志物。3.长链非编码RNAAK001058在淋巴结转移与分化程度低的胃癌组织中较高表达,促进了胃癌的进展及转移进程;UCA1在早期胃癌组织中较高表达,其可以作为胃癌早期诊断的分子标志物。4.长链非编码RNA在血浆中以片段化形式存在,不同的片段在血浆中的含量不同,同一片段在胃癌患者血浆及正常人血浆中含量也存在差异。5.长链非编码RNA INHBA-AS1、CEBPA-AS1与其蛋白质编码基因在胃癌组织中的表达水平存在正相关,反义RNA可能调控相关蛋白质编码基因的表达来促进胃癌的发生发展。6.长链非编码RNA ZEB1-AS1在胃癌组织及血浆中高表达,可作为胃癌诊断的分子标志物。7.与无淋巴结转移的胃癌组织相比,ZEB1-AS1在淋巴结转移的胃癌组织中表达水平较高,高水平的ZEB1-AS1可促进胃癌的远处转移。8.上调ZEB1-AS1可以促进胃癌细胞的增殖。9.ZEB1-AS1参与了胃癌细胞的EMT进程。10.首次发现ZEB1-AS1可以通过与c-met蛋白质相互作用,上调c-met蛋白质水平来调控胃癌细胞的侵袭转移进程。综上,本研究证实了长链非编码RNA INHBA-AS1、MIR4435-2HG、CEBPA-AS1和AK001058在胃癌组织及血浆中高表达,4条lncRNA组合可以作为胃癌诊断的标志物,具有高的诊断敏感性及特异性,首次发现lncRNA在血浆中以片段化形式存在,血浆中可能存在不同的机制对长链非编码RNA进行降解或对不同长度片段进行保护。同时,该研究也证实长链非编码RNA ZEB1-AS1在胃癌组织及血浆中高表达,作为肿瘤转移相关的癌基因,可以通过调节c-met蛋白质的水平来调控胃癌细胞的侵袭转移进程。上述发现证实了长链非编码RNA对胃癌的形成及转移发挥至关重要作用,可以作为胃癌诊断的分子标志物及未来胃癌患者治疗的新靶点。