第一部分:筛选KIAA1199为甲状腺癌乳头状的潜在癌基因[目的]甲状腺癌是内分泌系统中最常见的恶性肿瘤。近十年来,甲状腺癌的发病率一直在稳步增加,主要是由于该疾病的诊断技术的进步。全世界大约80%的甲状腺癌被诊断为甲状腺癌乳头状癌。KIAA1199已报道与多种肿瘤的恶性进展及不良预后相关,但在甲状腺乳头状癌中未见报道。本部分研究旨在探索KIAA1199在甲状腺乳头状癌中的表达特征,分析其与临床病理分期间的关系。[方法]我们运用高通量筛选差异基因的方法在肿瘤基因组图谱（The Cancer Genome Atlas,TCGA）中的甲状腺癌RNA-seq数据库进行分析,筛选出潜在癌基因KIAA1199。对组织芯片进行免疫组化分析,在蛋白水平验证KIAA1199在肿瘤组织中的表达特征以及与临床病理特征的联系。[结果]TCGA数据库分析提示KIAA1199在甲状腺癌中可能是潜在癌基因,且组织芯片免疫组化的结果也验证了 KIAA1199在肿瘤组织中表达特异升高,且在淋巴结转移阳性的病人组织样本中升高更加显著。[结论]在甲状腺癌乳头状中,KIAA1199表达特异升高,且与恶性表型密切相关,可能是潜在的癌基因。第二部分:WGCNA分析KIAA1199调控网络及潜在通路[目的]KIAA1199可能是一个潜在的促进甲状腺乳头状癌恶性进展的癌基因。本研究旨在运用生物信息学的方法在KIAA1199共表达基因中进行调控网络的构建和潜在通路的探索。[方法]剔除离群样本后,运用加权基因共表达网络（WGCNA）的方法,将全基因组的进行基因聚类分析,构建出无尺度共表达网络,将所有基因进行模块的分割。鉴定出与KIAA1199表达最相关的模块后,将模块中的基因进行富集分析,探索KIAA1199在甲状腺乳头状癌中的潜在生物学功能和通路。[结果]WGCNA方法构建无尺度网络模拟基因共表达网络,将全基因组进行聚类分析,所有基因被分割成22个模块。其中棕色模块与KIAA1199的表达最相关。提取出棕色模块中的所有基因进行GO富集分析发现,该模块与细胞黏附、细胞迁移和细胞外基质聚集等生物学特征密切相关,提示KIAA1199可能在甲状腺乳头状癌的侵袭转移等恶性表型中发挥重要作用。[结论]KIAA1199所关联的核心基因的生物学功能标签为细胞迁移和细胞外基质聚集,为下一步体内外功能实验及机制探索提供了理论基础和指导。第三部分:KIAA1199在甲状腺癌乳头状中的功能及机制研究[目的]进行体内体外实验验证KIAA1199在甲状腺乳头状癌中的生物学功能,以及尝试探索其发挥生物学功能背后的潜在机制。[方法]设计特异靶向KIAA1199 mRNA的小干扰RNA（siRNA）在甲状腺乳头状癌细胞系中特异敲减KIAA1199的表达水平,并进行Transwell和Matrigel实验验证KIAA1199在肿瘤细胞迁移侵袭中的作用,以及构建裸小鼠尾静脉注射肺转移模型进行体内验证。运用GSEA方法预测KIAA1199发挥生物学功能的潜在通路并验证。[结果]在甲状腺乳头状癌细胞中敲减KIAA1199后,发现TPC-1和BCPAP两株细胞的迁移和侵袭能力均受到明显抑制。跟对照组相比,裸小鼠尾静脉注射shRNA-KIAA1 19稳转的BCPAP细胞后所诱导的肺部转移结节的数量和大小均显著降低。GSEA结果显示KIAA1199通过影响EMT从而促进肿瘤的侵袭转移。[结论]体外实验证实KIAA1199能够促进甲状腺癌乳头状的迁移侵袭能力;体内裸鼠尾静脉注射肺转移模型实验说明KIAA1199沉默后可以抑制甲状腺癌乳头状的侵袭转移能力;KIAA1199通过影响EMT从而实现促进甲状腺癌乳头状的侵袭转移。第四部分:KIAA1199在甲状腺癌乳头状中是mir-486-5p的直接靶点[目的]miRNA的异常表达与各种癌症的进展及预后密切相关。本部分旨在鉴定并验证调控KIAA1199表达的上游miRNA。[方法]运用Targetscan,miRDB和PicTar三种预测数据库挑选出具有最高预测分数的miR-486-5p,并运用TCGA数据库进行临床分析,运用荧光素酶报告基因、qRT-PCR以及western blot等进行生物功能相关验证。[结果]在甲状腺癌乳头状细胞中,荧光素酶报告基因、qRT-PCR以及western blot结果表明mir-486-5p直接靶向KIAA1199的3’-UTR区;过表达mir-486-5p能够抑制甲状腺乳头状癌细胞的迁移和侵袭。[结论]mir-486-5p特异靶向KIAA1199的3’-UTR区从而调控其表达,从而发挥抑制甲状腺乳头状癌的侵袭转移的作用。