禽流感严重威胁人类健康和生命安全,危害养禽业,造成巨大经济损失,而且目前出现了多种亚型禽流感病毒(avian influeNza virus,AIV)共存的局面。疫苗接种仍是当前预防禽流感的重要手段。单一亚型的HA、NA抗原甚至不能对相同亚型的毒株产生很好的免疫保护作用。因此,研究和开发广谱、高效、毒力低的多价疫苗(Polyvalent Vaccine)是禽流感疫苗发展的方向。然而随着病毒的毒力逐年增强及抗原的频繁变异,在疫苗株的选育上显得愈加艰难；又由于多价疫苗的相互干扰作用,会造成免疫原性降低或毒力增强等。因此,研制广谱、高效、低毒的疫苗一直是困扰人们的一个难题。其中,DNA疫苗被认为是防制禽流感最具潜力的基因工程疫苗之一。 本课题利用生物信息学手段将禽流感病毒诸多血清型的抗原表位进行比较分析,并对抗原性进行分析,筛选出稳定保守的禽流感病毒抗原表位。将9个保守的抗原表位串连在同一载体上,并同时保持抗原表位天然构象,该疫苗作用于机体几乎能模拟全病毒起作用。同时还进行复合多表位基因盒的密码子优化和人工合成；合成了396个核苷酸、可表达出9个具有独立抗原活性的抗原小片段,而且抗原表位彼此之间无互相影响。 将HA基因,minigene分别构建到表达载体中,并且将HA、minigene融合构建到相应的载体中。利用病原的主要保护性抗原基因和人工合成的复合多表位基因盒构建真核表达重组体；利用测定凝血活性检测HA基因的表达,利用标记基因EGFP、FASc的方法检测目标蛋白的表达,在哺乳动物细胞离体实验中检测到重组体的表达。 从培养条件优化入手,针对培养温度,培养基要求,接种时间和接种间隔,来控制大肠杆菌的生长和质粒的增殖；对碱裂解流程进行优化粗制质粒DNA,利用三次柱层析的方法制备高纯度质粒DNA。 上述结果说明所构建的DNA重组体有良好的免疫原性,为最终获得能同时预防多种亚型流感病毒的多价疫苗奠定了基础。