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研究背景：DFNA4是常染色体显性遗传性非综合征型耳聋的一个基因座位,最初是由于发现了定位于染色体19q13.33上的MYH14基因突变而被命名。2011年,Zheng J等人首次在美国1070家系中发现了DFNA4座位上的一个新的致聋基因CEACAM16,并通过生物信息学分析和体外实验初步鉴定了CEACAM16基因编码蛋白的相关功能。2013年,本研究团队收集了一个来自中国湖南省五代遗传的常染色体显性遗传家系(SY-026),通过采取传统的全基因扫描连锁分析法与最新的外显子组测序技术相结合的策略,发现了位于CEACAM16基因上的一个新突变位点,即位于4号外显子上的c.505G>A (p.G169R),该突变在家系中共分离,提示其为一个新的CEACAM16基因致聋突变位点。这是世界第二例、国内首例CEACAM16基因致聋突变,意义重大。在本研究中,我们对本研究团队前期发现的CEACAM16基因新突变开展了一系列体外实验,以了解此突变位点对蛋白结构、功能及定位的影响。目的：观察CEACAM16基因野生型及其突变型G169R在体外细胞中的表达与定位,以探讨该突变可能的致聋机制。方法：以获赠质粒为模板,构建带C-端Flag的目的真核表达质粒pRK5-CEACAM16-Flag (野生型)及pRK5-G169R-Flag(突变型)。将上述构建成功的两种质粒瞬时转染293T细胞,48小时后分别提取细胞蛋白及上清蛋白,行Western blot检测野生及突变蛋白的胞内表达量及其各自的胞外分泌情况。细胞免疫荧光检测野生蛋白和突变蛋白的亚细胞分布情况。结果：1.成功构建了野生型pRK5-CEACAM16-Flag质粒及突变型pRK5-G169R-Flag质粒,并经双酶切及测序鉴定。2.用Western blot检测CEACAM16野生型及G169R突变型与Flag融合蛋白在293T细胞中的表达,发现表达后的两种蛋白分子量大小与预期相符,存在多聚体形式,且在胞内和胞外均可检测到目的蛋白,但突变蛋白的胞外分泌量较野生蛋白明显减少。3.细胞免疫荧光实验发现,CEACAM16野生蛋白和G169R突变蛋白均主要分布在细胞质中,无明显的区域聚集现象,且两者在胞内的分布无明显差异。结论：CEACAM16基因的新突变G169R可致突变蛋白的细胞外分泌量减少,但不影响突变蛋白在细胞内的分布。