固相萃取—高效液相色谱法检测大豆及豆制品中的多胺含量

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多胺主要包括腐胺、亚精胺、精胺等。生物体内的多胺对体内的各种生理活动起着非常重要的作用。目前主要的检测方法主要有酶免疫法、薄层色谱、气相色谱法、毛细管电泳法、离子色谱法和高效液相色谱法等。其中应用最广泛的是高效液相色谱法,其优点是高效、准确、快速等。本课题建立起来的一套采用丹磺酰氯柱前衍生多胺-固相萃取多胺衍生物-反相高效液相色谱法分离多胺衍生物-荧光检测器同时检测多胺衍生物的方法。首先,以丹磺酰氯作为柱前衍生试剂与亚精胺和精胺进行反应,确定了衍生反应的最佳条件:用Na2CO3-NaHCO3缓冲溶液调节反应溶液的pH值为10,在70℃下反应30min。色谱分析条件为:流动相使用甲醇:水=80:20保持3min,从3min到14min,甲醇比率由80%梯度增至100%;荧光检测器检测,激发波长为340nm,发射波长为515nm。采用液-液萃取对衍生物进行纯化,并绘制了亚精胺与精胺的标准曲线,得到亚精胺的回归方程为:Y=-0.1229+0.2723X (R=0.9942);精胺的回归方程为Y=0.0633+0.1237X (R=0.9950)。其次,采用固相萃取技术对衍生产物进行萃取,取代了传统的液-液萃取技术。确定出淋洗液为20%的丙酮-水溶液,洗脱剂采用3mL甲醇。在所确定的最佳实验条件下,作亚精胺和精胺的标准曲线,得到亚精胺的回归方程为:Y=0.1548+0.2604X (R=0.9987);精胺的回归方程为: Y=0.1565+0.1293X(R=0.9998)。亚精胺衍生物峰面积的相对标准偏差为0.93%,检出限为0.32pmol;精胺衍生物峰面积的相对标准偏差为0.87%,检出限为0.29pmol。最后,在所确立的最佳实验条件下,对大豆、酱油、腐乳和清麴酱进行测定。测定出大豆样品中亚精胺和精胺的含量分别为2.24mg/Kg,3.87mg/Kg,酱油样品中亚精胺和精胺的含量分别为10.84mg/L,21.72mg/L,腐乳样品中亚精胺和精胺的含量分别为29.08mg/Kg,59.48mg/Kg,清麴酱样品中亚精胺和精胺的含量分别为14.99mg/Kg,30.03mg/Kg。另外,对已知含量的样品进行加标实验,大豆、酱油、腐乳和清麹酱加标后的亚精胺平均回收率分别为85.2%,85.8%,90.6%,87.8%;精胺的平均回收率为87.1%,88.1%,93.2%,89.6%。研究结果发现,本方法具有操作简单、选择性好、检测时间短、应用广泛等优点,可用于大豆、酱油、清麴酱中的多胺的检测,能够为临床医学和食品分析等领域的研究提供数据支持。
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