【摘 要】
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血管细胞粘附分子-1(VCAM-1,又名CD106)是一种非常重要的细胞粘附分子,属于免疫球蛋白超家族(IGSF)成员。VCAM-1胞外区蛋白有7个结构域(分子量为110 kD),其中结构域1(D1)和结
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血管细胞粘附分子-1(VCAM-1,又名CD106)是一种非常重要的细胞粘附分子,属于免疫球蛋白超家族(IGSF)成员。VCAM-1胞外区蛋白有7个结构域(分子量为110 kD),其中结构域1(D1)和结构域4(D4)是VCAM-1与其配体VLA-4特异性结合作用部位。VCAM-1与其配体VLA-4相互作用,并参与许多种不同的生理现象,如调节炎症反应、参与免疫应答、促使淋巴细胞的归巢以及再循环、参与细胞和组织的分化、发育还有参与肿瘤的扩散、转移等。在体外表达具有生物活性的VCAM-1 D1-D4结构域将有助于深入研究VCAM-1的生物学功能。本研究通过从小鼠的成纤维细胞(NIH/3T3)提取总RNA,以其为模板通过RT-PCR扩增VCAM-1 cDNA。利用PCR获得VCAM-1胞外区D1-D4基因,连接pMD19-T载体,进行基因序列测序。测序结果显示目的片段序列正确,无突变。将VCAM-1胞外区域目的片段分别插入到原核表达载体pET28a和真核表达质粒pIRES2-AcGFP1-Nuc中,构建重组原核表达质粒pET28a-VCAM-1 D1-D4以及真核表达质粒pIRES2-AcGFP1-Nuc-VCAM-1 D1-D4。双酶切鉴定重组的 pET28a-VCAM-1 D1-D4 质粒和pIRES2-AcGFP1-Nuc-VCAM-1 D1-D4质粒成功构建。将原核表达质粒pET28a-VCAM-1 D1-D4转化大肠杆菌BL21并由IPTG诱导使其表达,SDS-PAGE电泳检测显示诱导表达的目的蛋白高表达。利用脂质体梭华-Sofast把pIRE S2-AcGFP 1-Nuc-VC AM-1 D1-D4 导入至人 B 淋巴性白血病细胞株(Raji)内,Western blot检测实验显示导入pIRES2-AcGFP1-Nuc-VCAM-1 D1-D4质粒的Raji细胞中VCAM-1 D1-D4高表达。VCAM-1 D1-D4结构域蛋白的成功表达为研究VLA-4/VCAM-1相互作用提供实验基础,也为进一步研究前B细胞分化发育提供实验依据。
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