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目的：检测OPG(骨保护素)在不同直径大小人腹主动脉瘤(AAA)组织中的表达情况,探讨其在腹主动脉瘤发生发展过程中的作用。方法：(1)应用免疫组织化学方法检测20例AAA组织(包括6例小腹主动脉瘤(SAAA):横径4.0-5.5cm,6例中腹主动脉瘤(MAAA):横径5.5-7.0cm,4例大腹主动脉瘤(LAAA):横径≥7.0cm,4例破裂型腹主动脉瘤(RAAA)和对照组6例正常腹主动脉组织OPG的表达。(2)Western-blooting和RT-PCR技术检测不同直径大小瘤体中OPG,MMP-9蛋白及mRNA表达情况。结果：(1)与正常腹主动脉对照,AAA组织中OPG的阳性细胞明显增多,主要分布于中膜,并与炎性细胞浸润程度呈显著正相关,AAA组中OPG的表达明显高于对照组,差异具有显著性(P<0.05)。(2)OPG的蛋白及mRNA表达在AAA组明显高于正常腹主动脉,差异具有显著性(P<0.05),且与MMP-9表达及瘤体直径呈显著正相关。结论：OPG水平与AAA有关,OPG可能通过促进基质金属蛋白酶的表达和炎症细胞浸润,在基质和细胞水平参与腹主动脉结构损伤与重构,促进AAA形成和发展。目的观察兔体内主动脉壁剪切力变化情况下动脉成瘤的形态学变化及OPG的表达情况及其与中膜血管平滑肌细胞(VSMCs)密度降低的关系。方法取新西兰兔共24只,在肾动脉平面以下2cm将供体的一段腹主动脉壁作补片移植到受体腹主动脉而成瘤,分别在术后7,21,35天获取瘤体及腹主动脉组织标本,分别测量术前及成瘤后腹主动脉的形态学参数,免疫组织化学法检测OPG抗原的表达,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测OPG、MMP-9的mRNA表达,Western blot检测OPG、MMP-9的蛋白产物表达,原位末端DNA标记技术(TUNEL)测定中膜VSMCs凋亡的变化；计算机图像分析并计算VSMCs密度及平均光密度。结果实验组兔存活15只,腹主动脉血流通畅,无吻合口狭窄,实验组腹主动脉直径随时间延长逐渐扩张,与对照组有显著差异(P<O.05)；HE染色显示明显增生的内外膜存在大量免疫炎性细胞浸润,中膜明显变薄,平滑肌细胞排列紊乱,密度明显降低。特殊染色可见中膜弹力蛋白明显纤细,僵硬,平滑肌层明显变薄,计算机图像进一步分析显示,瘤体内外径随时间延长逐步增加,弹力蛋白、胶原纤维含量与外径呈显著负相关(P<0.05)；免疫组织化学染色显示实验组OPG表达显著高于对照组(P<0.05),且表达水平与瘤体大小成正比。Western免疫印迹及RT-PCR结果显示OPG、MMP-9的蛋白及mRNA表达呈阳性,且随瘤体直径扩大而表达逐渐增强,而正常对照组无明显的阳性条带。TUNEL检测发现,实验组凋亡细胞明显高于对照组,其中阳性VSMCs凋亡占35%以上,与瘤体外径呈显著正相关。结论1血管补片法构建的AAA是一种稳定可靠的动物模型,适用于AAA发病机制及防治的体内研究。2动脉壁剪切力变化可以引起局部OPG, MMP-9表达增加及VSMCs凋亡增加。3 OPG表达与VSMCs凋亡具有相关性,可能对动脉瘤形成起着一定的作用。目的：利用OPG基因过表达及RNA干扰技术作用于人主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs),观察VSMCs凋亡的情况。方法：①实验材料：购买OPG基因,同时体外化学合成4条OPG序列特异性小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)。②实验方法：将购买的OPG基因亚克隆至穿梭载体上,同时随机选择一条shRNA,构建shRNA真核表达载体,包装腺病毒,转染人主动脉VSMCs。③实验分组：分为空白组、OPG过表达组、OPG过表达+RNA干扰组。④实验评估：应用RT-PCR,Western blot检测OPG基因表达的变化；应用流式细胞仪检测VSMCs凋亡情况。结果：①空白细胞组中,OPG表达量比较弱；OPG过表达组中,OPG表达量大大增加；OPG过表达+OPG RNA干扰组中,由于OPG表达受到抑制,OPG表达量下降较明显。②OPG过表达组的细胞凋亡率较空白细胞组有较大上升,而同时进行RNA干扰后,细胞凋亡率有一定程度下降,显示OPG的表达和VSMCs凋亡之间存在一个正比关系。结论：RNA干扰介导的OPG基因沉寂可显著抑制VSMCs的凋亡,OPG的过表达可明显加速VSMCs的凋亡。