论文部分内容阅读
目的观察免疫抑制剂FK506对大鼠脊髓损伤后脊髓运动功能行为学的变化和病理改变,探讨FK506对轴突导向因子slit-2表达的变化及意义,为临床治疗脊髓损伤提供实验室依据。方法选取健康成年SD大鼠150只,随机平均分成三组:假手术组(n=30)、损伤组(n=60)和FK506治疗组(n=60)。用Allen法建立大鼠T10脊髓损伤模型,各组动物分别于损伤后1、3、7、14和28 d 5个时相点采用BBB评分法进行脊髓功能评分,后处死大鼠取损伤区脊髓组织观察组织病理,用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)和免疫组化法观察轴突导向因子slit-2的变化及意义。结果(1)BBB评分结果:假手术组脊髓神经功能正常,BBB评分达20分;损伤组和FK506治疗组均有神经功能障碍表现,其中术后1、3 d评分均小于2分,差异无统计学意义(P>0.05),术后7 d后治疗组经FK506治疗后神经功能较损伤组明显改善,分值随时间增加而变大,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。(2) HE染色结果:假手术组见脊髓灰白质界限清楚、神经元及髓鞘结构正常;而损伤组和治疗组均有不同程度的变化,从局部片状出血、周围炎性细胞的浸润、神经元胞体的萎缩、胶质细胞的反应性增生、白质呈网状脱髓鞘及瘢痕形成,且治疗组明显轻于损伤组。(3)免疫组化法结果:slit-2在假手术组大鼠脊髓组织前角运动神经元中呈少量散在表达,损伤组和治疗组灰质胶质细胞胞质和神经元胞质内可见明显的slit-2的表达,且随时间推移而变化,术后3 d阳性细胞表达量开始增加,术后7 d达最高峰,之后呈下降趋势,且治疗组与损伤组各个时相点相比组间方差分析有统计学意义(P<0.05),其中,术后3、7 d 2个时相点相比组间方差分析有统计学意义(P<0.01)。(4)RT-PCR结果:假手术组slit-2 mRNA表达较低且稳定,损伤组和治疗组slit-2 mRNA的表达水平随时间推移而变化,术后1 d即可见slit-2 mRNA的表达,术后3d slit-2 mRNA表达开始上调,于术后7 d达到峰值,之后slit-2 mRNA表达逐渐下降,各时相点组间方差分析有统计学意义(P<0.05),其中,术后3、7 d 2个时相点相比组间方差分析有统计学意义(P<0.01)。结论大鼠脊髓损伤后早期,应用低剂量FK506在一定程度上可促进运动功能的恢复及对轴突导向因子slit-2的表达具有明显的促进作用,可能是通过FK506介导炎性细胞的迁移及分泌的因子对再生轴突的导向性的正确生长发挥重要的作用。