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本文从苏北盐城盐沼地区采集土壤和海水样品,包括芦苇带(L)、米草带(M)、碱蓬带(J)、海水(W)、混合植物带(H)、未知植物带(U),采用冲入卤代甲烷气体作为唯一碳源和能源DM培养基,富集可以降解卤代甲烷(CH3Cl和CH3Br)的微生物,最终分离出18株氯甲烷降解菌,未分离出溴甲烷降解菌。通过16SrDNA测序及同源性分析,一共分离到8种氯甲烷降解菌:M-1 为不动杆菌(Acinetobacter sp.)、H-3-1 为不动杆菌(Acinetobactersp.)、W1-1 为伯克氏菌属(Burkholderia sp.)、L-1 为伯克氏菌属(Burkholderiasp.)、W2-1-1为假单胞菌属(Pseudomonas sp.)、J-2为潘多拉菌属(Pandoraea sp.)、M-2 为食酸菌属(Acidovoraxsp.)、H-1 为柄杆菌属(Caulobacter sp.),共计 2株不动杆菌,1株假单胞菌,2株伯克氏菌,1株柄杆菌,1株潘多拉菌,1株食酸菌。通过气相色谱分析,比较8株菌降解CH3Cl的速率发现,从芦苇带土壤中分离得到的菌株L-1降解速率最高,同时选择一株从海水中分离得到的菌株W2-1-1,对这两株菌进行实验研究。菌株W2-1-1在DM培养基上的生长特征为:圆形菌落,边缘浅黄色,中间橘黄色。菌株L-1在DM培养基上的生长特征为:圆形菌落,黄色,中间深,湿润光滑,边缘规则。两株菌均为杆状,大小(长×宽)为200nm×100nm,无芽孢,革兰氏阴性,不含Fexirubin色素。菌株W2-1-1可以利用的碳氮源少于菌株L-1。两者均可以利用丙二酸盐、葡萄糖铵、糊精、西蒙枸椽酸盐、D-核糖作为碳氮源,L-1还可以利用蕈糖、葡萄糖、氨基酸肉汤对照、山梨醇、七叶苷、赖氨酸脱羧酶、胆汁七叶苷、山梨糖、精氨酸脱羧酶、果糖肉汤、鸟氨酸脱羧酶、卫矛醇、精氨酸双水解酶、蜜二糖肉汤、尿素、肌醇、甘露醇、甘糖,W2-1-1还可以利用醋酸盐、精氨酸双水解酶肉汤对照、阿拉伯糖、木糖、半乳糖,两者均不可以利用水杨素、木醇肉汤、α-苦杏仁苷、葡萄糖酸盐、棉子糖、酒石酸盐、N-乙酰葡糖胺、苯丙氨酸、硫化氢、蔗糖、胆汁溶菌肉汤、乳糖、丙醇酸钠、DNA、松三糖、纤维二糖、鼠李糖、β-半乳糖苷(ONPG)、松二糖作为碳氮源。两株菌的最适生长条件相同,最适pH为7.0,最适温度为30℃,最适盐度为0%。菌株W2-1-1在4%的盐度内均可生长,而菌株L-1在盐度超过2%时即停止生长。菌株W2-1-1的对数生长期为12-60h,菌株L-1的对数生长期为24-60 h。经分子鉴定,菌株W2-1-1与Pseudomonassp.Pier14的同源性高达99%,菌株L-1与Burkholderia gladioli ATCC 10248的同源性高达99%,因此确定菌株W2-1-1 属于Pseudomonasp.菌株 L-1属于Burkholderia sp.。本文探究菌株对CH3Cl降解速率的影响因素发现:相较于在牛肉膏蛋白胨培养基生长,菌株L-1和W2-1-1在DM培养基(以CH3Cl作为唯一碳源和能源)上生长后对CH3Cl的降解速率更高,降解功能更强;当反应体系中同时存在O2和NO3-作为电子受体时,菌株W2-1-1对CH3Cl的降解率为60%,而仅以O2作为电子受体时其降解率为43.8%,说明在W2-1-1降解过程中N03-还原比O2接受电子更容易进行,而L-1对CH3Cl的降解率在两种条件下分别为56.4%和49.3%,没有显著差异。菌株W2-1-1与L-1的共同作用相对于单菌作用并没有增加CH3Cl的降解,说明两株菌之间没有协同作用。前人研究表明,菌体中的cmuA基因与CH3Cl的的降解有关,可编码具有特异性甲基转移酶和类咕啉结合功能的蛋白。以cmuA基因中的保守区域以及基因的独特结构设计PCR引物,通过PCR扩增鉴定W2-1-1和L-1菌体基因组中是否含有cmuA基因,初步探究这两株菌降解CH3Cl的作用机理。PCR扩增测序未得到阳性产物,判断两株菌可能不含有cmuA基因,也可能目前采用的cmuA基因引物无法适用于L-1和W2-1-1,需要从新菌株中获得更多cmuA基因序列来改善引物序列。因此不能确定菌株L-1和W2-1-1在降解CH3Cl时是否可以诱导依赖类咕啉的甲基转移途径产生。