CRFR2在中枢神经系统肿瘤中表达的研究

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CRF是一种重要的下丘脑神经肽,主要分布在下丘脑,调节机体在应激状态下的下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)的功能,对应激状态下的内分泌、自主神经系统、免疫系统、生理学及行为学等方面的反应也有协调作用。此外,CRF还广泛分布在外周组织中,功能涉及到心血管、胃肠道、皮肤、泌尿、生殖及肿瘤增殖、体温等方面。CRF有二种具有生理学活性的受体,即CRFR1和CRFR2,CRF通过与其受体结合发挥效应。CRFR2是CRF的一种重要受体,现有的研究文献报道在一些类型的人类恶性肿瘤中也已经发现有CRFR2的表达,并在一些动物模型实验中证实CRFR2与肿瘤的增殖、转移、肿瘤血管的发生和免疫逃避等有关。而至今国内外尚未有CRFR2在中枢神经系统神经上皮源性肿瘤中表达的明确报道。目的:探讨促肾上腺皮质激素释放因子受体2 (CRFR2)在人类中枢神经系统胶质瘤组织、垂体瘤组织及人类神经胶质瘤细胞株U87中的表达情况。方法:随机收集临床手术切除的病理诊断明确的各种类别的胶质瘤30例,10例垂体腺瘤及购买人类胶质母细胞瘤株U87,应用CRFR2抗体分别对所收集到的组织标本和培养细胞进行免疫组化染色(IHC和ICC)并分析结果。提取培养细胞U87的总RNA,设计引物,进行RT-PCR实验,对扩增产物行琼脂糖凝胶电泳,分析CRFR2mRNA在U87上的表达。应用医学统计学软件SPSS13.0,对CRFR2与肿瘤标记物MGMT、GFPA、P53、MMP-9及胶质瘤的病理分级分别进行直线相关关系的统计分析,进而分析CRFR2的表达与胶质瘤的关系。结果:免疫组化样本中可见CRFR2阳性肿瘤细胞,着色部位位于细胞膜部位。多为体积较大、核大或可见核分裂、核浆比例也较大的细胞,其中有些阳性染色稍强呈棕褐色,有些稍弱呈淡黄色,且着色呈散在或片状分布不均。组织中绝大多数间质细胞呈阴性,在有些病例还可见血管内皮细胞或坏死区也表达为阳性。在不同的样本中,阳性细胞百分率存在较大差异,约在5%~90%。10例垂体腺瘤均表达阳性,其中5例泌乳素腺瘤表达为中度阳性至强阳性,1例促甲状腺激素腺瘤表达强阳性,1例促肾上腺激素腺瘤表达为弱阳性和3例生长激素腺瘤均表达为弱阳性至中度阳性。在30例胶质瘤中,星形胶质细胞瘤16例,CRFR2表达阳性的有5例,占总星形胶质细胞瘤的31.25%(5/16),其中病理分级为Ⅱ级的6例,Ⅱ~Ⅲ级2例,均无阳性表达,6例Ⅲ级标本中2例无阳性表达,2例弱阳性,1例中度阳性,1例强阳性,2例Ⅳ级标本中有1例表达中度阳性;病理级别均为Ⅳ级的多形性胶质母细胞瘤3例中有1例表达强阳性,2例阴性;8例少支胶质细胞瘤病理分级Ⅱ级4例,Ⅱ~Ⅲ级3例,Ⅳ级1例,均无阳性表达;室管膜瘤共2例全部表达为阴性,其中病理级别为Ⅱ、Ⅲ级各一例;髓母细胞瘤1例无阳性表达。U87细胞株中免疫组化分析CRFR2表达为阴性,RT-PCR的扩增产物琼脂糖凝胶电泳显示无条带,提示CRFR2mRNA在U87培养细胞中无表达。对CRFR2与MGMT、GFPA、P53、MMP-9及胶质瘤的病理分级分别进行直线相关关系的分析,得到的r值分别是0.157、-0.150、0.157、0.248、0.363;P值分别为0.408、0.430、0.408、0.185、0.049。CRFR2与肿瘤分级的关系r值0<0.363<1,P=0.049< a=0.05,而与其他4种指标的P值都大于0.05。结论:在上述所研究的神经肿瘤类型中,在垂体腺瘤中,CRFR2在泌乳素腺瘤和促甲状腺激素腺瘤,促肾上腺激素腺瘤及生长激素腺瘤中均有阳性表达。而在人类胶质母细胞瘤株U87中CRFR2表达为阴性;CRFR2在部分星形胶质细胞瘤和多形性胶质母细胞瘤中有程度不一的阳性表达,但在少枝胶质细胞瘤、髓母细胞瘤及室管膜瘤中皆表达为阴性。统计结果认为CRFR2与MGMT、GFPA、P53、MMP-9之间的直线相关关系无统计学意义;而CRFR2与胶质瘤的病理分级有正的直线相关关系,即CRFR2在胶质瘤上的表达随着胶质瘤病理级别的增加而增加,分析认为CRFR2在胶质瘤上表达有统计学意义和临床意义。
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