应用PCR技术，从小鼠基因组中克隆了1.61kb的乳清酸蛋白（WAP）基因5′端启动子上游调控序列，将其克隆于pGEM-T载体后，经酶切图谱分析和序列测定证实，本实验所克隆的基因片段即为WAP5′调控序列，与文献已发表的序列比较，除少数碱基发生转位外，其序列基本一致。启动子及其上游序列中的各主要调控元件序列均未发生变化。 为了对所扩增的WAP5′上游调控序列指导外源基因在乳腺中表达进行评估，将其与tPA（人组织型纤溶酶原激活剂）cDNA融合构建了乳腺定位表达载体pWTS，分别将此载体与原有的三个载体pCTS、pRWTS和pBTS，与脂质体混合后，经乳腺导管注入妊娠后期家兔的乳腺内进行暂时表达，利用ELISA方法检测乳汁中tPA的含量。结果表明，除了裸pWTS未检测到表达外，经脂质体包裹的4个载体均获得表达。表达水平从低到高依次为pCTS(pRWTS〈pBTS〈pWTS，其中pWTS的表达量在四个载体中最高。这一结果表明所扩增的WAP5′上游调控序列可指导转基因在乳腺中高效表达。 将人Bcl-2和c-myc cDNA分别与WAP基因5′启动子上游调控序列融合，构建了两个乳腺定位表达载体pWBS和pWCS。用BglII+SalI+PvuI三酶切pWBS和用BglII+BamHI双酶切pWCS，分别回收并纯化3.0kb的基因片段WAP-Bcl-2-SV40polyA和3.5kb的基因片段WAP-c-myc-SV40poly，作为目的基因，通过受精卵显微注射技术，分别导入C57BL／6J雌鼠与DBA／2J雄鼠交配的F1代小鼠受精卵的雄原核中，各注射约1000枚，将存活的受精卵各600枚分别移植至29只假孕母鼠输卵管壶腹部内。获得注射过Bcl基因片段的仔鼠55只，经PCR检测，Bcl阳性鼠12只，Southern blot阳性鼠4只，其中2只母鼠，2只公鼠，在饲养过程中，两只公鼠均意外死亡。Western blot检测，两只转基因母鼠中，有一只母鼠的乳腺组织能够表达 26KDa的 BclZ蛋白，其 FI代的 40只小鼠中，有 18只呈 PCR阳性，其中 8只为母鼠，在 5个月的反复怀孕过程中，尚未观察到乳房有肿瘤或肿块的出现，表明BclZ单独在转基因鼠乳腺中表达，不能引发乳腺癌：获得注射过厂myc基因片段的仔鼠共45只，PCR阳性鼠9只，Southern blot阳性3只，其中1只母鼠，2只公鼠，在饲养过程中，一只母鼠意外死亡。对两只转基因公鼠的 FI代 PCR检测表明，仅一只公鼠具有遗传性，在所生的 FI代 27只小鼠中有u 只呈 PCR阳性，其中母鼠为 6只。通过上述实验，本研究为进一步深入研究BclZ和 c－myc在体内的生物学特性提供了转基因小鼠模型。