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目的人乳头瘤病毒(HPV)是一种小型无包膜、双链环状DNA病毒，其分型依据是根据L1基因的序列相似性制定,L1基因的序列相似性<90%为新的型别，相似性在90%~98%之间为同一型别的不同亚型，相似性>98%为同一型别的不同变异株。全世界约70%的宫颈癌和高危型HPV16、18型直接相关，大约25%的口腔癌与高危型HPV有关，安徽省合肥地区宫颈癌发生率与感染HPV16具有较高的相关性。本研究通过克隆安徽省人乳头状瘤病毒16型(human papillomavirus type16, HPV16)全基因组，分析HPV16全基因组序列，并以全基因组序列信息为基础构建含HPV16全基因组的表达载体，为建立HPV16转染体系打下基础。方法(1) HPV16全基因组克隆：收集5例安徽省宫颈癌病理组织标本并提取总DNA，在GenBank中下载不同的HPV16全基因组序列并用DNAStar软件进行序列比对，将HPV16全基因组分成4个区段，即HPV-A、HPV-B、HPV-C和HPV-D，分别设计4对特异性引物，分段克隆HPV16全基因组，测序后进行序列拼接及核苷酸序列分析。(2)构建环化的HPV16全基因组：对含有HPV16的总DNA进行滚环扩增，回收1拷贝线性HPV16全基因组，再用连接酶使其自环化，BamHI位于片段HPV-A内，PCR扩增环化HPV16中的片段HPV-A，验证是否构建成功。(3)构建HPV16全基因组表达载体：同尾酶BamHI和BglII双酶切表达载体pLEGFP-N1，1拷贝线性HPV16插入双酶切后的载体pLEGFP-N1，命名pG/1H；扩增HPV16基因组中6152-120bp的片段(相当于0.2拷贝HPV16基因组)，改造载体pLEGFP-N1的酶切位点，将0.2拷贝HPV16插入质粒pG/1H，命名pG/1.2H，测序验证PCR保真性，酶切验证构建是否成功。结果(1)检测到1个宫颈癌病理样本中含有HPV16并获得全基因组序列，序列全长7906nts (GenBank登录号：KC935953)。序列比对发现，安徽HPV16(HPV16-Anhui)与HPV16-TH和HPV16-JP的全基因组核苷酸序列相似性最高，达99.5%。系统关系树分析显示，HPV16-Anhui与其他7个HPV16型聚成1个单独的分支。(2)环化的HPV16DNA电泳速度与线性HPV16有明显差异，从环化的HPV16中成功扩增出片段HPV-A，说明构建成功。(3) BamHI和HindIII双酶切pG/1.2H，得到14797bp (其中载体pLEGFP-N16891bp，1拷贝HPV167906bp)和1857bp (0.2拷贝HPV16)2个条带，验证HPV16全基因组表达载体构建成功。结论(1)获得安徽省首例HPV16全基因组核苷酸序列，HPV16-Anhui与不同地区HPV16亲缘关系均较近且基因组变异性较小。本研究对进一步了解安徽省甚至华东地区HPV16病毒基因组变异和进化规律具有重要意义。(2)成功构建含HPV16全基因组的表达载体和环化的HPV16全基因组，为HPV16完整基因组转染细胞的体系奠定基础。