湛江地区猪场环境中耐药基因检测及fexB基因传播方式的研究

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近年来,猪瘟(CSF)、猪繁殖与呼吸综合征(又称猪蓝耳病)(PRRS)、猪伪狂犬病(PR)是危害养猪生产的主要疾病,造成我国养猪业严重经济损失。由于抗生素的不合理使用及滥用,作为动物和环境常见菌之一的大肠杆菌极易产生耐药性,且耐药基因长期存在并易在动物源、环境源和人源细菌间进行水平传播,影响环境与公共卫生安全。为了解湛江地区猪场三种猪病的免疫后抗体水平情况与粪土中耐药基因和大肠杆菌的耐药情况。用ELISA法检测2018-2020年采集湛江地区13个不同规模猪场的226份血清样品中猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征及猪伪狂犬病的免疫抗体水平。用PCR技术对湛江地区10个猪场采集的100份猪粪及土壤样品检测21种常见耐药基因,并用微生物法分离鉴定出88株大肠杆菌对其测定22种抗生素的耐药性,通过结合转移与电转化法初步探讨大肠杆菌fex B耐药基因在粪源与土源大肠杆菌中的传播方式。主要研究结果如下:1.湛江地区猪场三种猪病抗体检测分析为了解湛江地区CSF、PRRS、PR的免疫状况,采用ELISA法对13个猪场的226份血清样品进行抗体检测。结果显示,3种猪病的血清抗体平均阳性检出率中,猪伪狂犬病疫苗毒中和抗体(PRV-g B)最高,为93.52%;伪狂犬病野毒中和抗体(PRV-g E)最低,为38.50%;CSF、PRRS血清抗体平均阳性检出率分别为83.74%、85.71%。存栏数量小于200头猪场CSF、PRV-g B抗体阳性率高达100%,PRV-g E抗体阳性率最低,为20%;存栏数量大于200头的猪场猪PRRS、PRV-g B抗体阳性率均为85%以上,CSF抗体阳性率均为80%以上。湛江地区猪场CSF、PRRS、PRV-g B免疫抗体水平及保护率较高,但伪狂犬野毒感染率也较高;说明CSF、PRRS、PR免疫效果好,同时应加强对伪狂犬野毒的抗体检测与监测。2.猪场粪、土中分离大肠杆菌耐药性测定为了解猪场粪、土中大肠杆菌的耐药情况,从湛江地区10个猪场采集的100份粪、土样品中分离鉴定出88株大肠杆菌,进行药敏试验测定其对22种抗生素的敏感性。结果显示,分离的大肠杆菌耐药率较高,阿莫西林、多西环素、土霉素及粘菌素耐药率最高,均达100%;头孢菌素类药物耐药率最低,均小于10%。大多数粪中分离细菌的耐药率比土中分离菌高,多重耐药多为15-22耐。说明湛江地区猪场粪、土中细菌耐药严重且多重耐药趋势流行。3.猪场环境中耐药基因的检测及fex B基因传播方式为了解猪场粪、土中耐药基因的分布情况,用PCR技术对湛江地区10个猪场采集的100份猪粪及土壤样品进行21种常见耐药基因检测,并通过结合转移与电转化法初步探讨大肠杆菌fex B耐药基因在大肠杆菌中的传播方式。结果显示,8大类抗生素耐药基因在粪、土中均有检出,各耐药基因检出率均高于50%;大多数耐药基因在粪便的检出率比土壤中高,耐药基因在粪、土中存在相似性。粪、土中携fex B基因的大肠杆菌结合转移形成4株接合子并有1株菌电转化成功。表明湛江地区粪、土环境中存在多种耐药基因,耐药基因可在粪、土大肠杆菌中发生水平传播造成污染环境,对公共卫生安全构成了一定威胁。
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