三叶半夏脱毒快繁及离体块茎诱导

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对我国浙江省、四川省、安徽省和北京等半夏主产地的栽培及野生三叶半夏(Pinellia ternata(Thunb.)Breit.)的病毒进行了检测,并以带毒的栽培三叶半夏为材料进行了脱毒快繁及离体块茎诱导研究。获得以下研究结果。 分别于2004年3月和2005年3月,采用DAS-ELISA方法对我国部分主产地的三叶半夏Pinellia ternata(Thunb.)Breit.和野生三叶半夏上的芋花叶病毒(Dasheen mosaic virus,DsMV)和黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)进行检测,结果显示:在我国三叶半夏普遍受到芋花叶病毒及黄瓜花叶病毒的侵染。其中,21个浙江宁波栽培半夏样品中CMV与DsMV的检出率分别为71.4%和14.3%,18个浙江萧山栽培半夏样品中CMV与DsMV的检出率分别为100%和44.4%;21个河北栽培半夏样品中CMV和DsMV的检出率分别为61.9%和33.3%;12个安徽栽培半夏样品中CMV和DsMV的检出率分别为50.0%和41.7%;12个四川栽培半夏样品中CMV和DsMV的检出率均为16.7%;16个北京栽培半夏样品中DsMV的检出率为31.3%,未检测到CMV。25个来自全国各地的野生三叶半夏样品中DsMV和CMV的检出率均为20.0%。 以栽培三叶半夏为材料进行组培快繁研究,结果显示:(1)不同类型的外植体适合采用的表面消毒处理方法不同。(2)以0.5mm左右的顶芽为外植体进行组培快繁,初代培养基适合采用MS+1.5mg/L 6-BA或MS+2.0mg/L 6-BA+0.1mg/LNAA,而继代培养与扩繁适合采用培养基MS+1.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA。(3)以半夏叶柄切段为外植体诱导再生分化成苗适合采用培养基MS+1.5mg/L6-BA或MS+1.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA或MS+2.0mg/L 6-BA+0.1mg/LNAA。极性、定向及在母体的位置影响叶柄切段再生与分化成苗,再生分化成苗的数目由高到低的顺序为:Pp1/H>Pp1/Vup>Pp1/Vin;Pp3/H>Pp1/H>Pp2/H。(4)半夏试管苗生根适合采用培养基1/2MS+0.3mg/L IBA+0.01mg/L 6-BA+0.5g/LAC。 以带毒的栽培三叶半夏为材料进行了脱毒快繁研究,结果显示:以茎尖为外植体对带毒植株进行脱毒处理时发现,茎尖分生组织培养与热处理结合并未显著提高脱毒效果,0.2mm以下的茎尖分生组织进行培养是获得三叶半夏脱毒苗的有效方法。用DsMV与CMV抗体,通过DAS-ELISA方法对茎尖分生组织培养获得的试管苗及移栽苗进行病毒检测,获得均不带DsMV与CMV的三叶半夏。为确保获得的脱病毒半夏不带DsMV与CMV,我们对同一茎尖来源的培养物在不同生长阶段进行多次病毒检测,成功获得了脱除两种病毒的三叶半夏组培苗。种胚培养苗DAS-ELISA检测均不带DsMV和CMV。 以获得的脱毒苗为基础,研究了三叶半夏离体块茎形成的部分影响因素,结果显示:0.005mg/L GA3可轻微促进离体块茎形成;(0.05,0.5,5)mg/L ABA抑制
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