成熟的足细胞,也称肾小球上皮细胞,是依附于肾小球基底膜（glomerular basement membrane,GBM）的高度分化的细胞。足细胞由胞体、主突及足突3部分组成,由于其特殊的结构,与肾小球基底膜一起构成了肾小球血液滤过屏障,对于阻止蛋白丢失起到重要作用。近来,越来越多的实验证明许多肾脏疾病的发生及发展与足细胞的损伤及功能的异常有密切的联系。microRNA（miRNA）是一类内源性单链非编码RNA分子,长度约为22个核苷酸。它主要通过与靶基因完全或不完全互补配对结合,进而对mRNA进行翻译抑制或诱导其降解,来调控基因的转录与表达。miRNA在许多物种中均有表达包括植物、动物甚至一些藻类。事实上,一些研究已经表明在足细胞中敲除Dicer或Drosha等对miRNA的产生具有重要作用的酶,会导致蛋白尿及肾小球硬化症^[1],说明miRNA对于维持足细胞的功能的稳定具有重要作用。miR-200b是miR-200家族中的一员,miR-200b-3p是由小鼠pre-mi R-200b的3’臂剪切加工得到。已有很多研究表明miR-200b-3p对于上皮细胞-间质细胞的转化（EMT）起到重要的调控作用,比如过表达miR-200b-3p可以抑制膀胱癌中上皮细胞到间质细胞的转移^[2]。关于miR-200b-3p的研究大多集中在癌症方面,对于其在肾脏及与肾脏相关的细胞方面的研究却较少。Raman Agrawal等的研究表明miR-200b-3p家族在肾脏中有丰富的表达^[3];Li等研究表明miR-200b-3p可以通过靶向调控RSAD2来促进足细胞的分化^[4]。所以miR-200b-3p对于维持足细胞的生理功能发挥重要作用。瞬时受体阳离子通道6（TRPC6）是一种可以通透Ca²⁺的离子通道。已有研究报道TRPC6基因突变会导致局灶节段性肾小球硬化（focal segmental glomerulosclerosis,FSGS）^[5];并且TRPC6的过渡激活会激活钙调神经磷酸化酶（Calcineurin）进而导致细胞骨架蛋白F-actin的重排,引起足细胞的损伤及蛋白尿的产生^[6]。所以TRPC6对足细胞功能的稳定具有重要作用。大电导钙激活钾通道(BK_Ca)是一种受胞内Ca²⁺与膜电位双重调控的离子通道。由于BK_Ca与TRPC6通道是在足细胞中共表达的离子通道,所以TRPC6可能为BK_Ca的激活提供Ca²⁺源。并且BK_Ca对于调控足细胞内Ca²⁺的自平衡发挥重要作用。因此,本实验主要研究抑制miR-200b-3p对足细胞TRPC6及BK_Ca的影响。实验采用条件性永生化足细胞系（MPC5）,分化成熟后,使用全细胞膜片钳技术记录CON组、miR-200b-3p inhibitor组和siRNA CON组足细胞的TRPC6及BK_Ca离子通道的电流。主要实验结果如下:1、下调miR-200b-3p抑制了TRPC6通道的电流及蛋白表达:结果显示下调miR-200b-3p抑制了足细胞TRPC6 mRNA转录及蛋白表达水平,并减小了足细胞TRPC6电流幅值。2、下调miR-200b-3p抑制了BK_Ca通道的电流及mRNA表达:结果显示下调miR-200b-3p对抑制了足细胞BK_Ca mRNA表达转录水平,并减小了足细胞BK_Ca电流幅值,使其I-V曲线斜率减小,激活曲线向去极化方向移动。3、下调mi R-200b-3p对足细胞内Ca²⁺浓度的影响:结果显示,下调miR-200b-3p导致胞内Ca²⁺浓度下降。4、抑制TRPC6通道对BK_Ca通道的影响:结果显示抑制TRPC6通道减小了足细胞BK_Ca电流幅值,使其I-V曲线斜率减小,激活曲线向去极化方向移动。综上所述,下调miR-200b-3p抑制了足细胞TRPC6及BK_Ca通道的转录水平及蛋白表达,减小了TRPC6及BK_Ca通道的电流,并减少了足细胞[Ca]_i,同时实验还发现抑制TRPC6通道会造成BK_Ca通道电流的抑制。这说明下调miR-200b-3p抑制TRPC6的电流,使得足细胞[Ca]_i水平下降,这可能减少了BK_Ca通道激活所需的Ca²⁺源,使得BK_Ca通道电流抑制。