shRNA干扰HIF-1α对人宫颈癌HeLa细胞HIF-1α表达及细胞周期分布和细胞凋亡的影响研究

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背景和目的:乏氧可以通过影响肿瘤细胞的周期分布和凋亡来影响肿瘤的放疗敏感性,乏氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1 alpha,HIF-1α)在乏氧引起的放疗抵抗中起了中枢调节作用。本研究采用RNA干扰技术抑制人宫颈癌HeLa细胞HIF-1α的表达,研究shRNA干扰HIF-1α对HeLa细胞周期分布和细胞凋亡的影响,并分析乏氧对人宫颈癌HeLa细胞周期分布及细胞凋亡的影响是否与HIF-1α有关。   方法:将人宫颈癌HeLa细胞株、转染HIF-1α-shRNA质粒的HeLa细胞株及转染pGenesil-1空白质粒的HeLa细胞株分别1%O2低氧培养(0h、12h和24h),应用Western blot检测三组细胞HIF-1α蛋白的表达情况。应用流式细胞术检测上述三种细胞不同乏氧时间点的周期分布及凋亡情况。采用统计学软件SSPS16.0行t检验及方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。   结果:Western blot分析显示三组细胞HIF-1α蛋白的表达量随着乏氧时间的延长而逐渐增加,差异均具有显著性(P<0.01),HIF-1α-shRNA/HeLa细胞HIF-1a蛋白的表达量在不同的乏氧处理时间点与pGenesil-1/HeLa细胞及HeLa细胞分别进行比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪分析细胞周期分布三组细胞随着乏氧时间延长G0/G1期细胞比例逐渐增加(P<0.01),S期细胞比例逐渐减少(P<0.01),即出现G1/S期阻滞的现象,抑制HIF-1α的表达以后,G1/S期阻滞的现象有所减弱。流式细胞术测凋亡率显示各组细胞在乏氧后凋亡率均有所增加,差异具有显著性(P<0.05),HIF-1α-shRNA/HeLa细胞的凋亡率不管是常氧组还是乏氧24h组均高于pGenesil-1/HeLa细胞和HeLa细胞,差异均具有统计学意义(P<0.01)。pGenesil-1/HeLa细胞与HeLa细胞之间在HIF-1a蛋白表达水平、G1/S阻滞程度和凋亡率上的差异均没有统计学意义(P>0.05)。   结论:HIF-1α-shRNA干扰人宫颈癌HeLa细胞后可以抑制HIF-1α的表达;使乏氧引起的G1/S期阻滞程度明显减弱,并使乏氧情况下的凋亡率明显增加。乏氧对人宫颈癌HeLa细胞凋亡及细胞周期分布的影响与HIF-1α有关。
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