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目的:制备和初步鉴定小鼠抗鸡蛋清提取物单克隆抗体。方法:以纯化后的蛋清提取物为免疫原,经背部皮下多点注射免疫BALB/c小鼠。采用棋盘滴定法确定抗原的最佳包被浓度,并通过间接ELISA法检测免疫小鼠血清效价,选取血清效价高的小鼠用于单克隆抗体的制备。无菌分离免疫小鼠脾脏,制成单个细胞悬液,与小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合。通过间接ELISA法筛选10株阳性融合孔中的融合细胞,采用有限稀释法进行克隆与亚克隆培养;间接ELISA法筛选可特异性分泌抗蛋清提取物单克隆抗体(monoclonal antibody, McAb)的杂交瘤细胞;增量培养法制备单克隆抗体; Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定McAb的Ig类与亚类;间接ELISA法检测杂交瘤细胞冻融前后产生McAbs的效价;Western blot鉴定McAbs的特异性。结果:采用棋盘滴定法确定抗原的最佳包被浓度为100 ng?mL-1。经克隆及3～4轮亚克隆,8株克隆失去产生抗体的能力,最终获得2株可稳定分泌抗蛋清提取物McAb的杂交瘤细胞,分别命名为5E12和4F1;其分泌的McAb均为IgG1。Western blot分析表明,McAb 4F1可与转印至膜上的蛋白形成单一条带,所识别的靶分子的相对分子质量(Mr)约为44KD。间接ELISA法检测两株细胞冻融前后所产生的McAb5E12、4F1的效价分别为1:5000、1:300。结论:成功地制备了两株抗蛋清提取物McAb 5E12和4F1,为下一步制备、纯化特异性抗蛋清提取物单克隆抗体提供了杂交瘤细胞,并为进一步建立快速检测、提取、纯化及鉴定食物中蛋清变应原的方法,奠定了有效的实验基础。