胰岛素与葡萄糖对ICR小鼠早期胚胎体外培养的影响

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[目的]研究胰岛素与葡萄糖联合对ICR小鼠1-细胞胚胎体外发育中的作用,为进一步优化胚胎体外培养体系提供理论与实验依据。[方法]实验一:观察在CZB培养液中同时加入胰岛素与葡萄糖对ICR小鼠1-细胞胚胎体外发育的影响。实验共分四组,第1组:对照组,胚胎在不含胰岛素与葡萄糖的培养液中培养;余下为实验组,第2组:胚胎在胰岛素浓度为0.05μg/ml的培养液中培养;第3组:胚胎在葡萄糖浓度为3mmol/L的培养液中培养;第4组:胚胎在胰岛素浓度为0.05μg/ml及葡萄糖浓度为3 mmol/L的培养液中培养。连续培养120小时,分别计算2-细胞率、4-细胞率、桑葚胚率、囊胚率和孵化胚率,并进行囊胚细胞计数。实验二:观察在CZB培养液中同时加入胰岛素与葡萄糖,它们不同的浓度搭配对ICR小鼠1-细胞胚胎体外发育的作用。实验共分两步,第一步,共分八组:第1组:对照组,胚胎在不含胰岛素与葡萄糖的培养液中培养;第2,3,4,5,6,7,8组:实验组,同时加入胰岛素与葡萄糖,胰岛素的浓度都为0.05μg/ml。而葡萄糖的浓度依次为0,0.2,0.5,1,3,5,10 mmol/L。连续培养120小时,同样计算2-细胞率、4-细胞率、桑葚胚率、囊胚率和孵化胚率,并进行囊胚细胞计数。第二步,实验分为九组:第1组:对照组,胚胎在不含胰岛素与葡萄糖的培养液中培养;第2,3,4,5,6,7,8组:实验组,同时加入胰岛素与葡萄糖,胰岛素的浓度都为0.5μg/ml。而葡萄糖的浓度依次为0,0.2,0.5,1,3,5,10 mmol/L;第9组为实验二第一步的第7组,连续培养120小时,同样计算2-细胞率、4-细胞率、桑葚胚率、囊胚率和孵化胚率,并进行囊胚细胞计数。[结果]实验一:与对照组比较,各实验组2-细胞率、4-细胞率、桑葚胚率无差异(P>0.05),除第2组外,各实验组囊胚率与孵化胚率显著增加(P<0.05),各实验组囊胚细胞数显著增加(P<0.05);各实验组间比较,第3、4组囊胚率显著增加(P<0.05),其中第4组的孵化胚率和囊胚细胞数显著增加(P<0.05)。实验二:第一步:与对照组相比,各实验组2-细胞率、4-细胞率、桑葚胚率无差异(P>0.05),除第2组外,各实验组囊胚率与孵化胚率显著提高(P<0.05),各实验组囊胚细胞数显著增加(P<0.05);各实验组间比较,当胰岛素浓度为0.05μg/ml,而葡萄糖浓度为5 mmol/L时孵化率和囊胚细胞数显著增加(P<0.05)。第二步:与对照组相比,各实验组2-细胞率、4-细胞率、桑葚胚率无差异(P>0.05),除第2组外,各实验组囊胚率与孵化胚率显著提高(P<0.05),各实验组囊胚细胞数显著增加(P<0.05);各实验组间相比,第6与第9组的孵化率显著提高(P<0.05),第9组的囊胚细胞数显著增加。[结论](1)在CZB培养液中同时加入葡萄糖与胰岛素可促进小鼠1-细胞胚胎的发育;(2)在CZB培养液中,胰岛素浓度为0.05μg/ml时,葡萄糖浓度为5mmol/L为最适的浓度搭配。
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