论文部分内容阅读
目的1.探讨子宫内膜异位症在位内膜间质细胞中Ras基因表达与ERK/NF-кB通路之间表达的相关性及可能机制;2.探讨Ras基因调控ERK/NF-кB通路影响在位内膜间质细胞增殖、侵袭性的变化。方法1.选取2018年9月至2019年6月宁夏医科大学总医院妇科“腹腔镜卵巢囊肿剥除”、术后病理科诊断子宫内膜异位症的育龄期妇女患者15例,术中取得在位子宫内膜组织。分离、培养、提纯在位内膜间质细胞,稳定传代后通过细胞免疫化学及细胞免疫荧光化学进行间质细胞鉴定。2.细胞免疫荧光化学检测细胞中Ras、ERK及NF-кB表达情况;构建过表达PAQR3慢病毒(特异性抑制Ras),筛选MOI值转染15例子宫内膜异位症患者在位内膜间质细胞,设立病毒组(过表达PAQR3慢病毒)、空载组(空慢病毒载体)、空白组(同等条件下未添加任何干预);采用RT-PCR及Western-Blot分别检测慢病毒转染前后Ras、ERK、NF-кB基因mRNA及蛋白表达情况;分别构建ERK siRNA及NF-кB siRNA,转染相同15例子宫内膜异位症患者在位内膜间质细胞;设立转染组(ERK siRNA/NF-кB siRNA)、空siRNA组(无意义链同源siRNA)、空白组(等比例转染试剂),采用RT-PCR及Western-Blot检测siRNA转染前后Ras、ERK、NF-кB蛋白表达情况,分析Ras与ERK、NF-кB在子宫内膜异位症在位内膜间质细胞中表达。3.通过CCK-8、Transwell检测慢病毒抑制Ras前后在位内膜间质细胞增殖、侵袭性的变化,探讨Ras调控ERK/NF-кB通路进而影响细胞增殖及侵袭性,促进疾病发生发展的潜在机制。结果1.细胞免疫荧光化学结果显示Ras、ERK及NF-кB三者均主要表达于间质细胞胞浆内;2.慢病毒转染内异症患者在位内膜间质细胞后,病毒组较空载组及空白对照组,Ras的mRNA及蛋白表达均下降,差异具有统计学意义(P<0.05);同时ERK及NF-кB mRNA和蛋白表达均下降,差异均具有统计学意义(P<0.05);2.ERK siRNA干预内异症在位内膜间质细胞后,ERK siRNA组较空siRNA组、空白组的ERK及NF-кB mRNA和蛋白表达下降,差异均具有统计学意义(P<0.05),而Ras mRNA和蛋白表达变化无统计学差异(P>0.05);3.NF-кB siRNA干预内异症在位内膜间质细胞后,NF-кB siRNA组较空siRNA组和空白组的NF-кB mRNA和蛋白表达下降,差异具有统计学意义(P<0.05),Ras及ERK mRNA和蛋白表达变化均无统计学差异(P>0.05);3.慢病毒抑制Ras在子宫内膜异位症间质细胞表达后,CCK-8检测细胞增殖活性显示慢病毒转染后病毒组与空载组比较,在24h的A值差异不具有统计学意义(P>0.05),然而在48h、72h、96h及120h时间段均具有统计学意义(P<0.05),慢病毒抑制子宫内膜异位症间质细胞Ras表达细胞增殖活性下降;Transwell检测结果显示病毒组细胞48小时穿膜细胞数与空载组及空白对照组穿膜细胞数比较,差异具有统计学意义(P<0.05),间质细胞侵袭性受到抑制。结论子宫内膜异位症在位内膜间质细胞中Ras是调节ERK/NF-кB通路因子表达影响细胞增殖及侵袭性变化,促进内异症发生发展。