【摘 要】
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泛素化是真核生物修饰转录后的蛋白质的重要方式之一,在植物的生长发育中发挥着重要的调节作用。在泛素化修饰过程中,底物的特异性选择与与之相关的泛素连接酶直接相关。作为泛素连接酶四大类其中之一的U-box泛素连接酶的作用在植物应答生物和非生物胁迫等逆境信号时所发挥的作用不容小觑。本论文通过结合遗传学、分子生物学和细胞生物学的研究手段,初步探讨了U-box家族的AtPUB9在拟南芥种子萌发和幼苗生长中的功
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泛素化是真核生物修饰转录后的蛋白质的重要方式之一,在植物的生长发育中发挥着重要的调节作用。在泛素化修饰过程中,底物的特异性选择与与之相关的泛素连接酶直接相关。作为泛素连接酶四大类其中之一的U-box泛素连接酶的作用在植物应答生物和非生物胁迫等逆境信号时所发挥的作用不容小觑。本论文通过结合遗传学、分子生物学和细胞生物学的研究手段,初步探讨了U-box家族的AtPUB9在拟南芥种子萌发和幼苗生长中的功能。通过一系列的表型观察和AtPUB9表达模式的分析,发现AtPUB9可能参加了ABA抑制的种子萌发和幼苗生长的发育过程。主要结果总结如下:1.在拟南芥中缺失AtPUB9基因的功能,pub9突变体并没有表现出明显的生长表型。但是,在施加外源ABA的条件下,pub9的种子萌发和幼苗的均受到了影响,呈现ABA敏感性增强的表型。2.拟南芥中过量表达AtPUB9(OE)转基因株系对ABA的敏感性呈现降低的表型。在ABA的处理中,OE株系的种子萌发和幼苗的生长对ABA的敏感性减弱,表现出与突变体相反的表型。3.与野生型相比,pub9突变体和过量表达株系在其它发育阶段的表型并无明显差异,暗示AtPUB9在种子萌发和幼苗生长时期发挥着十分重要的作用。4.结合组织定位,细胞定位和荧光定量PCR的方法,观察到AtPUB9在幼苗中的相对表达量最高,同时在花序和角果中也有有较高的表达量。在原生质体中瞬时表达PUB9-YFP,观察到PUB9-YFP定位于定位于细胞质和细胞核中。5.对生长5天的幼苗分别用不同的激素和非生物胁迫瞬时处理,并通过GUS检测和q RT-PCR检测分析,结果显示ABA,Na Cl和mannitol能够明显增强AtPUB9的表达水平。6.进一步的分析显示,高盐和高渗均能够抑制pub9幼苗的生长。与野生型相比,pub9突变体的种子萌发明显迟于野生型的和过量表达株系以及其幼苗的根的伸长明显短于野生型的和过量表达株系。
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