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目的:高危型HPV整合到人染色体后,其原癌基因E6、E7及所表达的原癌蛋白在宫颈癌的发生和发展过程中起重要的作用。本实验使用特异的靶向于HPV16 E6、E7基因的siRNA作用于表达HPV16阳性的人宫颈鳞癌细胞株CaSki和SiHa,观察其对HPV16E6、E7基因的特异性抑制作用,为探讨使用siRNA治疗宫颈癌的可行性提供实验基础。方法:1.分别设计并合成靶向于HPV16 E6、E7的siRNA各3条(E6-1 siRNA、E6-2 siRNA、E6-3 siRNA、E7-1 siRNA、E7-2 siRNA和E7-3 siRNA)、用作阳性对照的β-actin siRNA和阴性对照的NControl siRNA。一部分NControl siRNA带荧光标记(FAM-NControl siRNA),使用阳离子脂质体试剂转染CaSki和SiHa,荧光显微镜观察转染效果。2.β-actin siRNA分别转染两株细胞,RT-PCR和Western Blot方法检测β-actin mRNA和蛋白表达的变化情况。3. E6-1、E6-2、E6-3 siRNA和E7-1、E7-2、E7-3 siRNA分别转染SiHa细胞,使用RT-PCR和Western Blot方法检测E6、E7 mRNA和蛋白的变化情况,各筛选出一条对靶基因干扰效率较高的siRNA。4.将筛选出的E6-1 siRNA和E7-2 siRNA分别转染两株细胞,RT-PCR和Western Blot方法检测转染后24、48、72及96 h E6、E7 mRNA和蛋白的变化情况。结果:1.荧光显微镜照片显示FAM-siRNA已转染进两株细胞。2.β-actin siRNA转染CaSki和SiHa后,同对照组相比,其β-actin mRNA和蛋白均显著降低(P<0.05),而脂质体组的表达水平无明显变化。3.同对照组相比,E6、E7 siRNA均可引起靶基因表达水平的显著性下降(P<0.05)。E6-1 siRNA和E7-2 siRNA对靶基因抑制作用较强。4. E6-1 siRNA和E7-2 siRNA转染两株细胞后24 h、48 h、72 h及96 h均可观察到靶基因表达的显著性降低(P<0.05),而对相应的非靶基因无明显抑制作用。结论:1.化学合成的siRNA可以通过阳离子脂质体成功转染人宫颈鳞癌细胞株。2.不同序列的E6、E7 siRNA,对靶基因的干扰效率不同。在本实验中,以E6-1对E6、E7-2对E7表达水平的降低作用最明显。3. E6、E7 siRNA分别作用于宫颈癌细胞,均引起了靶基因的特异、高效性的抑制,并至少维持到转染后96 h。