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目的:研究周围神经体外预变性的新方法,以便在短期内获得大量高效许旺细胞,观察其组建的组织工程化神经对坐骨神经缺损再生效果。方法:许旺细胞培养:6-8周龄清洁级C57BL/6小鼠骨髓源细胞(BMDCs)与其坐骨神经体外共培养为实验A组,无BMDCs介入的坐骨神经体外培养为对照B组。培养7d后行大体观察,复合酶消化预变后的神经片段,行许旺细胞培养。将两组许旺细胞配成浓度为1x10/ml。组织工程化神经的体外组建及实验动物分组、建模:分别组建许旺细胞-细胞外基质-聚乳酸管(PLA)的组织工程化神经。随机把40只6-8周龄清洁级C57BL/6小鼠分成4组,每组10只。建立小鼠坐骨神经缺损模型,坐骨神经保持5mm缺损。将A、B组许旺细胞配成浓度为1x10/ml,组建许旺细胞-细胞外基质-聚乳酸管(组织工程化神经),修复C57BL/6小鼠5mm坐骨神经缺损模型,建立小鼠A、B组模型。同时建立C组(细胞外基质-聚乳酸管修复5mm坐骨神经缺损)和自体神经移植D组(切断坐骨神经,倒置端端外膜缝合)。检测指标:坐骨神经体外培养大体观察;许旺细胞数量和纯度大致观察。实验动物建模后12周行大体观测、电生理检查、小腿三头肌湿质量检测和组织切片检查。结果:坐骨神经体外培养大体观察;许旺细胞数量和纯度大致观察:神经片段培养7d后A组较B组增粗明显,而且A组神经瘤样结构形成较B组大。经复合酶消化细胞培养48h在倒置相差显微镜和荧光显微镜下观察A组许旺细胞数量和纯度均高于B组。实验动物术后大体观察:各组小鼠造模成功,无死亡。术后左后肢跛行、五爪下垂。术后7周造模小鼠足底溃疡愈合良好,但足趾部分缺损,左后侧肌肉萎缩,尤C、B组明显。术后12周各组小鼠左后足底行50℃温浴患肢逃避反应,C组和B组小鼠感觉比较迟钝,逃避反应动作出现晚。A、D组小鼠小腿三头肌较C、B组恢复好,且跛行步态减轻。术后12周切取标本前观察A、B、C组导管外形正常,无明显塌陷膨大,大部分降解,导管表面有再生微血管,以A组较多,与周围组织稍粘连。建模后12周A组小鼠再生神经传导速度、小腿三头肌湿质量恢复率均高于B、C组(p<0.01),与D组接近。光镜和电镜观察导管内再生神经远1/3段,A、D组比B、C组神经纤维多,髓鞘厚。结论:1.坐骨神经与骨髓源细胞体外共预变,大量高效许旺细胞在短时间内可以获得。2.用这种改良方法获得的许旺细胞组建的组织工程化神经对坐骨神经缺损的再生效果较好。3.本实验为复合许旺细胞的组织工程化神经临床应用治疗周围神经损伤再生修复,提供了动物实验依据。