硝基呋喃类药物与牛血清白蛋白相互作用的研究

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硝基呋喃类药物作为一种广谱抗生素,可以有效抑制微生物体内酶的活性,由于硝基呋喃类药物对大多数由原虫和真菌病原体引起的疾病具有良好的治疗效果,被广泛用于畜牧和水产养殖业。虽然硝基呋喃类药物价格低、药效好,但有研究证明硝基呋喃类药物及其代谢物,可能会对人体产生致癌和致畸胎作用。血清白蛋白(SA)作为一种在人和动物体内血浆中含量最丰富的蛋白质,它与药物分子亲和力的大小。以及结合方式都将会影响药物在生物体内的分布和浓度,因此研究药物和SA相互作用的机理对了解药物的毒性等具有一定的研究意义。本文利用多种光谱方法研究了两种硝基呋喃类药物,呋喃妥因(NFT)和呋喃西林(NFZ)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用,对于深入理解硝基呋喃类药物在生物体内的运输和分布,阐明硝基呋喃类药物与生物大分子之间的作用机制具有一定参考意义。本文的研究主要分为四个部分:1.采用荧光光谱法、紫外-可见光谱法以及时间分辨荧光光谱法研究了模拟生理条件(pH=7.4)下NFT及其代谢物1-氨基海因盐酸盐(AHD)分别在单独存在和混合条件下与BSA的相互作用机制。实验结果表明:NFT和AHD对BSA的猝灭机制均主要为静态猝灭。NFT和AHD与BSA的结合常数KA分别为6.02×104 L mol-1和4.94×104 L mol-1,结合位点数n分别为1.28和1.43,说明NFT/AHD均可以与BSA形成1:1复合物。由热力学参数ΔH<0,ΔS<0可知,范德华力和氢键是NFT/AHD与BSA之间的主要作用力。根据F?rster非辐射能量转移理论,NFT和BSA的作用距离为2.67 nm,AHD和BSA的作用距离为2.69 nm,这表明BSA与NFT/AHD之间极有可能发生能量转移。紫外-可见吸收光谱和同步荧光光谱结果表明,NFT/AHD诱导BSA的构象发生变化。BSA与NFT/AHD只有一个结合位点,均位于BSA亚结构域II A处的SiteⅠ。2.NFT的代谢产物AHD会影响母体NFT与BSA相互作用机制。当AHD存在时,NFT对BSA的猝灭常数Ksv增大为7.91×104 L mol-1,结合常数KA增大为6.72×104 L mol-1。说明在代谢产物AHD的影响下,NFT对BSA的猝灭程度增强。在共存条件下,AHD和NFT与BSA的结合发生加和效应。3.采用多种光谱法研究NFZ与BSA结合反应的特征。结果表明:NFZ和BSA形成复合物,导致BSA的内源性荧光猝灭,猝灭方式主要是静态猝灭和非辐射能量转移。根据Stern-Volmer方程求出不同温度下的结合常数和结合位点数。根据Van’t Hoff方程和热力学公式,求得NFZ与BSA相互作用的热力学常数,确定了NFZ和BSA相互作用力类型为氢键和范德华力。利用紫外-可见吸收光谱和同步荧光光谱探讨了与NFZ作用前后BSA的构象发生变化。并利用位点竞争实验确定NFZ在BSA上的结合位置,位于BSA亚结构域II A处的SiteⅠ。4.研究了金属离子对NFZ与BSA相互作用的影响。实验结果表明:当与金属离子Zn2+和Mg2+共存时,NFZ对BSA的猝灭常数Ksv和结合常数KA减小。这表明Zn2+、Mg2+的存在会减弱NFZ对BSA荧光的猝灭程度,并降低NFZ与BSA的结合能力。Zn2+和Mg2+不会改变NFZ对BSA的荧光猝灭类型和作用力类型。
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