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琼胶是一种从石花菜等红藻中提取的,目前生产工艺和结构等方面研究比较成熟的海藻多糖,广泛应用于医药、食品等行业。但是,海藻多糖因为具有分子量大,粘度大,溶解度较小等特点,而使其应用范围受到限制。利用降解的手段对其进行修饰,降低分子量和粘度,改善溶解性,可以拓展其应用范围。并且根据文献报道,琼胶寡糖具有一些特殊的生物活性,如抗氧化性,抗炎症等。因此,对琼胶降解的研究具有重要意义。 本研究中,为了选择一种合适的降解方法,进行了几种水解方法的尝试,其中包括在不同温度和酸度下盐酸水解,过氧化氢和醋酸催化水解,Fenton体系羟基自由基降解。对于酸水解和Fenton体系氧化还原降解方法,通过粘度法对反应的速度进行了比较,表明氧化还原降解反应中琼胶的粘度降低比较快,并且具有代表性和新意,确定为本实验的降解琼胶的方法并对氧化还原降解所得的产物进行了活性实验。 通过模仿自然界普遍存在的氧化还原降解反应,利用Vc诱导的Fenton体系产生的羟基自由基氧化还原降解琼胶得到低分子量的琼胶。降解产物经过高速离心、60%乙醇沉淀,除去分子量比较大的降解产物和磷酸盐,得到可溶于60%乙醇的分子量估计小于3000的降解产物,其产率为85%。利用经Sephadex-G25凝胶色谱分离所得的不同分子量的级分进行分子量和α-葡萄糖苷酶抑制活性关系的实验。降解产物对α-葡萄糖苷酶的抑制率和各级分的浓度呈线性正相关,并且各级分的IC50则随着分子量的降低而降低。另外,对所得的降解产物混合物进行了红外吸收光谱、质子去偶核磁共振碳谱和负离子基质辅助激光诱导-飞行时间质谱结构分析。结果表明,氧化还原降解反应的专一性差,在得到寡糖的同时,在光谱图中出现一些比较复杂的副产物的结构信息。最后,根据MTT法的原理,以人体皮肤成纤维细胞为材料,通过紫外线辐射产生自由基造成氧化损伤,研究降解产物对成纤维细胞的保护作用。当无紫外线辐射时,降解产物对成纤维细胞具有显著的促进生长增殖作 卜剑 硕十学位论文:经拜基自由基断地琼胜及产物的活性分析 川;”’I经U*a、**b 辐射时则可以邓兴地表现出对损伤组细胞的保护作用, 爿。K这种促进’;(长和保护作用是民X的显效关系,表明降解产物具有清除公 样f-I山基的作用。但是,因为氧化还原降解反应的机理尚不十分明了以及琼 胶的特殊结构,使得反应的副产物很难预测,也就使得分离厂作难以进行, 5 所以,根据 11前所得的信息,尚不能确定是降解产物的什么组分产”上的以卜 两利I’I{物活性。