研究背景放射性皮炎是由放射线照射引起的皮肤炎症性损害,给患者带来极大的痛苦,严重影响肿瘤患者生活质量及放射治疗的疗效。国内外学者尝试使用多种药物或方法防治急性放射性皮炎,但至今仍没有一种理想的药物或方法供临床使用。中医认为放射线是一种火热毒邪,鼻咽癌患者急性放射性损伤的病因病机为邪热炽盛、气阴两虚,故中医的治法应以清热解毒、益气养阴为主。有学者尝试运用具有清热解毒功效的复方苦参注射液防治鼻咽癌急性放射性损伤,取得了比较好的疗效。复方苦参注射液的主要活性成分为苦参碱,现代药理学研究发现苦参碱具有较强的清除自由基的作用。辐射产生的自由基在放射生物学效应的发生上占有十分重要的地位,因此我们推测复方苦参注射液放射防护作用的机制可能是由于其具有清除自由基的作用。目前关于复方苦参注射液放射防护作用的研究存在的主要不足是,仍不明确运用复方苦参注射液保护正常细胞的同时,是否也会保护肿瘤细胞从而降低疗效,因此我们开展基础及临床研究进行探讨。一、复方苦参注射液对放射后人皮肤成纤维细胞增殖与凋亡的影响目的:观察复方苦参注射液对放射后人皮肤成纤维细胞(Human Skin Fibroblasts,HSF)增殖与凋亡的影响,评价复方苦参注射液是否对HSF具有放射防护作用,并探讨其作用机制。方法:HSF传代培养,取对数生长期细胞进行实验,将细胞随机分为空白对照组、单纯放射组、药物放射组。空白对照组:不给药,不照射;单纯放射组:只照射,不给药;药物放射组:给药后照射。四甲基偶氮唑盐法(methyl thiazolyl tetrazolium assay,MTT)检测复方苦参注射液对HSF增殖的影响,流式细胞术检测复方苦参注射液对HSF凋亡的影响,DCFH-DA荧光探针检测细胞内氧自由基。结果:复方苦参注射液处理HSF24h、48h、72h后,HSF增殖率轻度增加,在lmg/ml到16mg/ml的浓度范围内复方苦参注射液对HSF均无毒性作用。单纯放射组与药物放射组的HSF的增殖率分别为(60.23±3.28)%,(82.81±2.94)%,药物放射组高于单纯放射组,差异具有统计学意义(P<0.05);单纯放射组与药物放射组的HSF的凋亡率分别为(5.7±0.6)%,(1.9±0.3)%,差异具有统计学意义(P<0.05);经复方苦参注射液处理后,药物放射组HSF的氧自由基活性较单纯放射组明显降低(P<0.05),差异具有统计学意义。结论:1.复方苦参注射液能抑制放射线诱导的HSF凋亡并促进放射后HSF增殖。2.复方苦参注射液通过清除放射线产生的氧自由基,从而对HSF具有放射防护作用。二、复方苦参注射液对人鼻咽癌CNE-2细胞的放射增敏作用目的:观察复方苦参注射液对人鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性的影响,并探讨其作用机制。方法:常规体外培养人鼻咽癌CNE-2细胞,采用MTT法检测不同浓度复方苦参注射液分别处理CNE-2细胞24、48和72h的增殖抑制率,计算复方苦参注射液对CNE-2细胞的半抑制浓度(IC50)。CNE-2细胞分为空白对照组、单纯放射组和药物放射组。空白对照组:不给药,不照射;单纯放射组:只照射,不给药;药物放射组:给药后照射。单纯放射组给予剂量2Gy、4Gy的X射线照射,药物放射组给予一定浓度的复方苦参注射液处理后再接受相同剂量的X射线照射。MTT法检测各组细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞的凋亡率,克隆形成试验检测细胞的存活率。结果:复方苦参注射液处理CNE-2细胞24、48和72h的IC50分别为14.53、5.46和7.10mg/ml,对CNE-2细胞的毒性有一定的剂量和时间依赖性。当处理时间为0～48小时,复方苦参注射液对CNE-2细胞的抑制率与作用时间呈正相关,时效关系具有统计学意义(P<0.05)。因此,测定药物放射增敏作用的研究选择48小时为复方苦参注射液处理CNE-2细胞的时间,选择半抑制浓度(IC50)的1/5来测定药物的放射增敏作用。药物放射组CNE-2细胞的增殖抑制率分别为(54.10±2.77)%、(57.18±4.30)%,单纯放射组为(37.97±2.38)%、(40.56±1.72)%,差异有统计学意义(P<0.05)。药物放射组和单纯放射组CNE-2细胞的凋亡率分别为(8.3±2.6)%和(4.3±1.0)%,其存活率分别为(33.5±3.8)%和(42.3±3.6)%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:1.复方苦参注射液能增加鼻咽癌CNE-2细胞的放射敏感性,其机制主要是促进放射线诱导的CNE-2细胞凋亡。2.复方苦参注射液对人皮肤成纤维细胞具有放射防护作用,而对鼻咽癌CNE-2细胞具有放射增敏作用,符合放射防护剂的基本要求。三、临床研究目的:采用临床随机对照研究方法,对复方苦参注射液减轻鼻咽癌急性放射性皮炎的临床疗效进行初步评价,为大样本临床试验奠定基础。方法:62例鼻咽癌患者随机分为对照组、试验组,所有入组患者接受根治性放化综合治疗。试验组放疗期间每日静滴复方苦参注射液20ml+NS250ml,并接受常规护理与对症支持治疗,对照组接受与试验组一样的常规护理与对症支持治疗。观察两组患者放疗期间急性放射性皮炎及其他放射损伤的严重程度,评估患者的生存质量,并评价鼻咽癌的近期疗效。结果:1.临床试验基线情况自2014年6月到2018年7月共纳入广东省中医院放疗科收治的鼻咽癌患者62例,随机数字表法进行分组。治疗过程中有2例患者因个人意愿退出临床试验,其余60例患者均按计划顺利完成试验。两组间年龄、性别、职业、文化程度等一般人口学资料的差异无统计学意义(P>0.05),可以认为试验组与对照组在基线时的一般人口学特征均衡性较好,具有可比性。影响急性放射性皮炎的临床因素如KPS评分、体重指数、肿瘤分期、化疗、中医证型等,两组之间的差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。2.急性放射性皮炎分级比较放疗结束时,试验组3级、4级放射性皮炎的发生率分别为30.0%、13.3%,对照组分别为56.7%、20.0%,试验组患者严重放射性皮炎的发生率低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。当放疗总剂量大于40Gy,试验组患者的急性放射性皮炎RISRAS评分小于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。3.其他急性放射损伤试验组患者3+4级急性放射性口腔粘膜炎的发生率低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。两组患者唾液腺急性放射损伤严重程度的差异,无统计学意义(P>0.05)。两组患者血液学毒副反应严重程度的差异,无统计学意义(P>0.05)。4.生存质量对比放疗后试验组情感状况(EWB)、功能状况(FWB)、头颈模块(H&N)的评分及生存质量总分高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),但身体&生理状况(PWB)、社会&家庭状况(SWB)方面,两组差异无统计学意义(P>0.05)。5.近期疗效比较对照组病灶的完全缓解率(CR)及部分缓解率(PR)分别为80.0%、20.0%,试验组病灶的CR率及PR率分别为66.7%、33.3%。两组患者近期疗效的差异,无统计学意义(P>0.05)。6.中医证型变化放疗后两组患者热盛津亏证、气阴两虚证的例数均较放疗前增多,但试验组患者热盛津亏证、气阴两虚证的例数较对照组少,两组患者放疗后中医证型分布的差异,具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.鼻咽癌患者放疗期间运用复方苦参注射液能有效减轻急性放射性皮炎的严重程度,而且不会影响放疗的近期疗效。2.放疗期间运用复方苦参注射液能改善鼻咽癌患者的总体生存质量。3.鼻咽癌患者放疗期间运用复方苦参注射液能够减轻热毒之邪对机体的影响,减少患者放疗后发生气虚证、阴虚证的情况。