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阿勒泰羊、北京油鸡和五指山猪都是我国重要、濒危物种,现存数量极少,构建阿勒泰羊、北京油鸡和五指山猪的cDNA文库对于阿勒泰羊、北京油鸡和五指山猪遗传资源的保护以及羊、鸡和猪基因功能的研究具有重要意义。本研究分别构建了阿勒泰羊耳缘组织、北京油鸡肝脏组织和五指山猪肝脏组织的cDNA文库,并分别对三个文库的质量做了检测。
本研究取阿勒泰羊耳缘组织、北京油鸡肝脏组织和五指山猪肝脏组织,提取总RNA,运用SMARTTM技术构建了阿拉泰羊耳缘组织、北京油鸡肝脏组织和五指山猪肝脏组织cDNA文库。所构建的阿勒泰羊耳缘组织cDNA文库未扩增文库滴度为1.4×106pfu/ml,北京油鸡肝脏组织cDNA文库朱扩增文库滴度为3.06×106pfu/ml,五指山猪肝脏组织cDNA文库未扩增文库滴度为2.02×106pfu/ml;扩增后文库的滴度分别为1.2×1010pfu/ml、1.3×1010pfu/ml和1.16×1010pfu/ml。从扩增文库中随机挑取96个克隆进行PCR鉴定,结果表明重组率分别为94.8%、93.8%和90.6%,插入片段平均大小分别为1.16kb、1.32kb和1.0kb。
本试验成功地构建了阿勒泰羊耳缘组织、北京油鸡肝脏组织和五指山猪肝脏组织的cDNA文库,测序验证部分插入cDNA的全序列,经生物信息学分析,全长性比例为53.3%,是一种可靠的获取全长cDNA的方法。阿勒泰羊耳缘组织、北京油鸡肝脏组织和五指山猪肝脏组织全长cDNA文库的成功构建,为今后利用文库筛选差异表达基因提供了材料来源,为进一步研究绵羊、鸡和猪发育等的分子机制奠定了基础。为后续的大规模测序和表达谱芯片的制备,以及全长新基因的克隆和功能研究奠定了坚实的基础。