论文部分内容阅读
目的肺癌的发病率和死亡率在恶性疾病中增长速度是最快,同时也是危害人群健康和人类生命的恶性肿瘤之一[1 3]。肺癌发病的流行病学研究表明吸烟、大气污染、职业性吸入、电离辐射等与肺癌的发生有关,但是肺癌发病的机制仍不清楚。目前细胞信号转导通路的研究对肿瘤的发生、发展有突破性的解释,与肿瘤发生、发展最密切的信号转导通路是:MAPK信号转导通路、G蛋白偶联信号转导通路、NF-κB信号转导通路等,其中MAPK信号转导通路的激活与肿瘤发生的关系尤为密切。Raf激酶抑制蛋白(RKIP)是MAPK信号转导通路的生理性抑制蛋白,研究表明肺癌组织中RKIP基因缺失导致了其蛋白质低表达或缺失,但是随着表观遗传学的提出及研究的进一步深入,基因序列未发生改变也能改变蛋白质的表达状况,因此本实验主要从表观遗传学方向研究RKIP基因启动子甲基化与肺癌发生发展的关系。通过肺癌组织与癌旁正常组织中RKIP蛋白质和RKIP启动子甲基化差异的表达相关性研究,探讨RKIP基因甲基化与肺癌发生、发展的关系。方法选择2007年1月1日至2009年12月31日沈阳市胸科医院病理科和沈阳医学院附属中心医院病理科的肺癌石蜡包块120例(肺癌组织和癌旁正常组织),将石蜡组织包块制作成4um厚度的切片,使用兔抗人抗RKIP单克隆抗体和山羊抗兔抗IgG多克隆抗体对切片进行免疫组织化学(SABC)染色,分析RKIP在肺癌组织和癌旁正常组织中表达状况;同时切取10～15片石蜡切片提取DNA,经甲基化修饰后进行特异性甲基化PCR(MSP)扩增,观察RKIP基因启动子甲基化的情况;使用卡方检验探讨肺癌组织和癌旁正常组织中RKIP蛋白质和RKIP启动子甲基化的表达差异性;Spearman相关系数分析RKIP基因甲基化与肺癌患者5年生存率的相关性,同时绘制RKIP启动子甲基化与肺癌患者术后生存时间的生存曲线。结果免疫组织化学(SABC)结果显示:肺癌组织中RKIP蛋白质呈低表达或缺失表达,且明显低于癌旁正常组织,两者差异显著(P<0.01),有统计学意义;甲基化特异性PCR(MSP)结果显示:肺癌组织中RKIP启动子甲基化率高,明显高于癌旁正常组织,两者差异显著(P<0.01),有统计学意义;RKIP蛋白质表达与RKIP启动子甲基化相关性分析结果显示:RKIP蛋白质表达与RKIP启动子甲基化负相关性;spearman相关系数分析结果显示:RKIP启动子甲基化率越高,患者术后无病生存时间就越低,RKIP启动子甲基化与肺癌患者术后生存时间呈负相关关系,同时绘制RKIP启动子甲基化状态的生存曲线;肺癌组织不同亚型中RKIP蛋白质和RKIP启动子甲基化表达分析结果显示RKIP蛋白质和RKIP启动子甲基化的表达与肺癌组织学类型无关。结论肺癌患者组织中RKIP蛋白质水平低于癌旁正常组织,其中一个重要原因是肺癌患者组织中RKIP基因启动子发生了甲基化,并且RKIP启动子甲基化的水平与肺癌患者术后无病生存时间呈负相关。