白细胞介素-1β和地塞米松对成纤维细胞分泌角质细胞生长因子的影响

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目的:口腔扁平苔藓(Oral Lichen Planus, OLP)是口腔黏膜病中的常见病,多发病。可发生于口腔黏膜任何部位,最多见于颊黏膜,还可累及舌及牙龈等部位。据调查,该病的患病率为0.5-2.2%。OLP临床表现多种多样,以左右对称的白色条纹或白色斑块为主,可分为网纹型、丘疹型、斑块型、水疱型、萎缩型和糜烂型等。多数学者认为该疾病为T淋巴细胞介导的免疫相关性疾病,虽然其发生恶性转化没有被完全证实,但被认为是一种癌前状态。OLP组织学可出现上皮细胞增殖和凋亡的紊乱,病理学的特征表现为基底细胞液化变性,固有层淋巴细胞浸润,以及棘层、基底细胞层及固有层胶样小体形成。该疾病具有迁延反复、病程冗长、久治不愈的特点。该病的治疗方法较多,局部用糖皮质激素是一线治疗方法,也有报道称环孢菌素治疗OLP有肯定的效果。目前还没有方法彻底治愈口腔扁平苔藓。研究发现角质细胞生长因子(keratinocyte growth factor, KGF)能特异性的促进上皮细胞增殖,而不作用于成纤维细胞和内皮细胞,可用于治疗因上皮细胞损伤引起的溃疡,加速伤口的愈合。本实验通过MTT、酶联免疫吸附剂测定技术(ELISA)、聚合酶链反应(PCR)检测白细胞介素-1β(IL-1β)和地塞米松(DEX)对体外培养的人正常口腔黏膜与口腔扁平苔藓黏膜成纤维细胞增殖活性的影响;对成纤维细胞分泌角质细胞生长因子蛋白的影响,为临床上应用激素治疗口腔扁平苔藓的适应征的选择、用药时间及剂量控制提供理论依据,同时为临床治疗该疾病提供新的思路。方法:1.收集临床及病理确诊的正常口腔黏膜11例及口腔扁平苔藓黏膜14例,进行体外成纤维细胞培养。选用第3-7代细胞,分别加入三种浓度梯度的白细胞介素-1β和地塞米松培养液,继续培养48小时。(1)用MTT法检测不同浓度梯度的两种药物对各组成纤维细胞增殖活性的影响。(2)用酶联免疫吸附剂测定技术(ELISA)检测两种药物对成纤维细胞分泌角质细胞生长因子(KGF)蛋白的影响;(3)用聚合酶链反应(PCR)技术检测两种药物对成纤维细胞表达角质细胞生长因子mRNA的影响。每项实验结果均用平均光密度(opticaI density, OD)值表示。2.应用统计学分析软件分析细胞增殖活性和KGF蛋白OD值,以均数和标准差(X±s)描述。显著性检验采用单因素方差分析,组间比较采用t检验。P<0.05有统计学意义。结果:1.ELISA检测,口腔扁平苔藓黏膜成纤维细胞分泌角质细胞生长因子蛋白的量比正常口腔黏膜成纤维细胞分泌的少,两组OD值存在显著性差异(P<0.05)。而PCR结果却未见两组KGF mRNA表达有明显差别。2.加入白细胞介素-1β,口腔扁平苔藓黏膜成纤维细胞和正常口腔黏膜成纤维细胞的增殖活性均增强,分泌KGF蛋白的量及KGF mRNA的表达量均升高,且促进作用随白细胞介素-1β浓度的增加而提高。3.加入地塞米松,口腔扁平苔藓黏膜成纤维细胞和正常口腔黏膜成纤维细胞的增殖活性均受到抑制,分泌KGF蛋白的量及KGF mRNA的表达量均降低,且抑制作用随地塞米松浓度的增加而增强。结论:本实验发现白细胞介素-1β能够增加成纤维细胞角质细胞生长因子蛋白的分泌量,也可以增加成纤维细胞角质细胞生长因子mRNA的表达,且与IL-1β浓度呈正相关;相反,地塞米松抑制成纤维细胞分泌角质细胞生长因子蛋白,同时也抑制了成纤维细胞角质细胞生长因子mRNA的表达,且抑制的程度随浓度的升高而增强。基于角质细胞生长因子的作用以及本实验结果,可以为临床应用激素治疗口腔扁平苔藓适应征的选择、用药时间及剂量控制提供一定的理论依据,同时也为口腔扁平苔藓的治疗提供了新的思路。
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