【摘 要】
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黄鳝是我国重要的淡水养殖鱼类。随着集约化养殖的快速发展,黄鳝爆发出血病的情况也愈发严重。目前,针对黄鳝出血病的有效防治措施仍十分匮乏。本研究采用高通量测序手段获得黄鳝感染嗜水气单胞菌前后的脾脏转录组信息,并测定了聚维酮碘的杀菌效果,以期从理论和实践上降低出血病对黄鳝养殖业的影响。具体研究内容如下:1.黄鳝脾脏转录组分析对黄鳝感染嗜水气单胞菌的六个时间点(0 h、4 h、8 h、16 h、24 h和
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黄鳝是我国重要的淡水养殖鱼类。随着集约化养殖的快速发展,黄鳝爆发出血病的情况也愈发严重。目前,针对黄鳝出血病的有效防治措施仍十分匮乏。本研究采用高通量测序手段获得黄鳝感染嗜水气单胞菌前后的脾脏转录组信息,并测定了聚维酮碘的杀菌效果,以期从理论和实践上降低出血病对黄鳝养殖业的影响。具体研究内容如下:1.黄鳝脾脏转录组分析对黄鳝感染嗜水气单胞菌的六个时间点(0 h、4 h、8 h、16 h、24 h和48 h)进行脾脏转录组测序,共获得340,562,976条raw reads,经拼接组装后,获得69,705个unigenes,其中,有17,346个基因能在公共数据库中被成功注释。与未感染组相比,共存在7571个差异表达的基因,涉及360条信号通路,其中,造血细胞谱系通路、补体和凝血级联通路、抗原加工提呈通路、RIG-I样受体信号通路、Toll样受体信号通路和NOD样受体信号通路在感染过程中被显著富集。2.补体系统在抗菌感染中的免疫应答作用通过比较不同感染时期脾脏内参基因(18S rRNA、β-actin、EF1α、GAPDH和RPL17)的表达稳定性,发现18 SrRNA是稳定性最强的内参基因。同时,对补体系统的15个相关基因进行定量分析,发现旁路途径在感染过程中被持续激活,而经典途径和凝集素则在感染后期被激活,进一步验证了补体系统在黄鳝免疫机制中的重要作用。3.聚维酮碘的杀菌作用采用试管二倍稀释法时,聚维酮碘(PVPI)对6株嗜水气单胞菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度范围均为2-4 g/L;采用直接作用法时,10 mg/L PVPI在10 min内杀菌率可达100%。前者富含有机物,但其有效碘的含量却远低于后者,说明前者的杀菌浓度高主要是由于培养基的存在降低了PVPI的有效性,故推荐直接作用法来测定养殖水体中的杀菌效果。采用直接作用法测定不同养殖水体中PVPI的杀菌效果,结果显示,在含有10~5CFU/mL嗜水气单胞菌的室内养殖水、双蒸水和LB培养基中,PVPI的有效杀菌浓度分别为10 mg/L、1.25 mg/L和4000 mg/L;在室外养殖水中,PVPI的有效杀菌浓度为25 mg/L。然而,PVPI对黄鳝的半致死浓度为173.91 mg/L,远高于养殖水中的有效杀菌浓度,这表明25 mg/L PVPI能够对水体进行有效的消毒且不造成黄鳝个体的损伤。
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