酿酒酵母ARS305两侧序列对其复制活性的影响

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DNA复制是细胞的基本功能之一,在生长发育过程中,染色体必须准确无误地复制并分配到下一代细胞中。因此,复制过程受到极其严格的调控,任何失控必将导致严重的后果,包括发育异常、遗传疾病、癌症等。在复制的研究领域,确定真核生物复制起始点或复制子是一个重要方面。酵母是一类低等真核生物,既具有类似原核生物的生长特性,又具有一般真核生物的分子生物学和细胞生物学特性,是作为确定研究复制起始位点或者复制子的一个重要材料。酵母III号染色体是最早完成测序的,也是目前研究的最清楚的。自主复制序列ARS(autonomously replicating sequence)是能有效转化酵母并能在细胞内自主复制的一段DNA序列,在整合到酵母染色体后,能作为酵母的复制起始位点。ARS305是酿酒酵母III号染色体上一个高活性的,使用频率很高的复制子。为了研究其两侧序列对其活性的影响,本文构建了以pRS405为载体,插入不同长度的以ARS305为核心、两侧序列不同的一系列重组质粒;将构建的重组质粒采用PEG/LiAc转化酿酒酵母YPH499感受态细胞。通过测定重组质粒转化率来鉴定ARS305两侧的序列长度对其复制活性的影响。结果表明:ARS305两侧的序列长度越长,其自主复制活性越高。本研究为进一步研究ARS两侧序列形成核小体能力和ARS活性与核小体定位的相关性做出了初步探索。
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