辣木(Moringa oleifera Lam.)组培育苗及四倍体新种质诱导技术的研究

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本研究采用组织培养结合秋水仙素诱导技术,对优选的印度辣木改良品种PKM-1进行了同源多倍体的诱导研究,并对其快速鉴定、扩繁、试管苗生根移栽等问题进行了系统的研究,结果表明:无菌萌发是最基础的一环,从经济、省时、高质的角度出发,将洗净的辣木茎段以50%乙醇消毒25s,结合0.1%升汞处理9min为最好。辣木茎段组培再生受多种因素的影响:外植体启动培养中6-BA、NAA浓度分别为2.0mg/L、0.2mg/L时,诱导幼芽分化效果最好,诱导率达86.7%,平均产生3.17个腋芽。黑暗中诱导愈伤组织的最适培养基为MS+0.4mg/L6-BA+0.1mg/LNAA,当6-BA为0.6mg/L时,愈伤组织分化率达到80%。茎段最佳增殖培养基为MS+0.6mg/L 6-BA,增殖系数可达3.1。附加不同白砂糖浓度和多效唑浓度的实验结果表明,增殖和生根培养基可分别采用白砂糖浓度为3%,7%,MS+1.5mg/L PP333培养壮苗效果最好,且利于生根。基本培养基MS最适生根,生根率可达100%,且植株和根系长势良好。对离体培养条件下的再生植株抽样进行染色体数目检测发现,均为2n=2x=28,二倍体遗传稳定。在此基础上,采用秋水仙素溶液浸泡法对二倍体辣木进行诱导,结果表明,以0.1%秋水仙素溶液处理24h效果最好,四倍体诱导率达到19%。秋水仙素诱导获得了纯合的四倍体(2n=4x=56)和少许嵌合体。多倍体辣木在二倍体的最适增殖培养基和生根培养基上,增殖与生根情况良好,移栽四倍体初步获得成功。从形态学、生理生化特性及细胞学等方面对多倍体进行鉴定,结果表明:四倍体植株的叶片增厚,叶长变短、叶形指数变小,叶厚和叶宽分别是二倍体的325%和165%,叶长为二倍体的94%,略小于二倍体。四倍体的气孔密度是二倍体的75.8%;保卫细胞明显增大,长度和宽度分别为二倍体的121.8%和138.7%;叶绿素数目是二倍体的182.3%。经方差分析上述各项指标均达到了显著水平。因此,叶片厚度、叶片长度、叶形指数、气孔密度、保卫细胞的大小和保卫细胞内叶绿体数目等可作为鉴别二倍体和四倍体辣木的重要指标。对四倍体和二倍体辣木试管苗进行低温处理后,比较电解质外渗率。相同低温下,辣木四倍体的电解质外渗率低于二倍体。尤其是-5℃和-10℃时,二倍体的电解质外渗率分别为26.79%和39.04%,而四倍体的外渗率分别为20.78%和35.23%。首次对不同倍性辣木进行了抗旱性和抗热性的比较,结果表明,四倍体辣木的抗旱性,抗热性均强于二倍体,充分体现了多倍体抗逆性强的优势。对不同倍性辣木光合特性的测定结果发现,六个光合指标除叶片温度外均存在显著差异,且都与染色体倍性成正相关。叶绿素含量与光合作用密切相关,本实验测定结果发现,叶绿素含量随倍性的增加而增加,为指导辣木栽培生产和选育品种提供重要数据。
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