【目的】探究5-氨基酮戊酸光动力疗法(ALA-photodynamic therapy,ALA-PDT)对增生性瘢痕(Hypertrophic scar,HS)内皮细胞(endothelial cells,EC)生长特性的影响及诱导其凋亡具体机制以及内皮细胞与成纤维细胞之间的相互作用。从而为ALA-PDT防治增生性瘢痕提供实验依据以及相关临床治疗参数。【方法】1、传代培养脐静脉内皮细胞(HUVEC),取3～4代细胞用于实验,测定生长曲线,通过倒置荧光显微镜观察及测定不同ALA浓度(孵育4h)作用下,细胞内Pp IX的累积量的差异;通过CCK8细胞毒性试验分析一定浓度梯度范围内(根据Pp IX的荧光累积量曲线)单用ALA与联合应用ALA-PDT对HUVEC的增殖影响的差异性;2、通过Hoechest33258染色从细胞形态水平分析ALA-PDT作用于HSF可能诱发的凋亡现象;荧光倒置显微镜及ROS试剂盒检测不同处理组(0,单加药,单照光,ALA+PDT)之间ROS荧光量;Annexin V/PI从细胞群体水平检测ALA-PDT作用于HUVEC诱发凋亡的具体类别;3、ALA-PDT对HUVEC增殖抑制及诱导凋亡的潜在分子生物学机制探索:Western-Blot技术分析不同处理组(0,单加药,单照光,ALA+PDT)作用于HSF后细胞周期阻滞蛋白P53/P21/cyclin D1以及凋亡蛋白BCL2/BAX蛋白水平变化;4、通过ELISA实验检测分析不同处理组之间HUVEC分泌功能的改变,通过CCK8实验探索血管内皮细胞对瘢痕成纤维细胞增殖的影响。【结果】1、荧光显微镜下观察发现脐静脉内皮细胞内荧光累积量呈ALA浓度依赖性,并在浓度为2mmol/L时达到峰值。细胞毒性试验显示对照组,单纯加药,单纯照光组细胞活性无明显差异,ALA+PDT组细胞活性在药物浓度为2mmol,4mmol时受到显著抑制。(100±4.89vs52.85±4.72,P<0.01,100±4.89vs48.48±7.03,P<0.01)2、Hoechst染色和流式细胞分析显示,证实在ALA浓度为2mmol/L时,ALA-PDT可以诱导内皮细胞发生显著凋亡。(4.17±3.72vs30.23±5.33,P<0.01)。3、Western-blot显示:ALA-PDT可诱发HSF中P53通路细胞周期阻滞相关蛋白p53/p21/cyclin D1及凋亡蛋白Bcl-2/Bax变化;4、ELISA检测分析:ALA+PDT作用后,HUVEC分泌水平下降,细胞上清液中相关细胞因子(VEGF,ET-1,IL-8 and TGF-β1)分泌显著减少。CCK8实验表明ALA+PDT作用后,HUVEC对成纤维细胞增长促进作用降低。【结论】1、ALA+PDT能显著抑制HUVEC的存活率且可能通过诱导细胞凋亡效应实现。2、ALA-PDT介导HUVEC凋亡在分子生物学机制上表现为激发细胞内部ROS形成,从而激活P53信号以及P53下游蛋白表达水平的变化;3、ALA+PDT对于血管内皮细胞及瘢痕成纤维细胞之间的相互作用起到一定的影响。