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【研究背景】卵泡刺激素受体(follicle-stimulating hormone receptor,FSHR)是由垂体分泌的性激素,属于G蛋白偶联受体超家族的跨膜糖蛋白,具有促进排卵和精子的生成作用。最近研究发现,FSHR高表达于多种肿瘤新生血管内皮细胞表面,但在肿瘤相近的正常组织和炎症组织中都不表达。这提示FSHR是一种潜在的肿瘤标志物。因此获得抗FSHR的特异抗体具有诊断和治疗价值。骆驼免疫系统中存在一种独特的天然缺失轻链的重链抗体(heavy chain antibodies,HCAb),与常规抗体相比,具有稳定性强,易制备,弱免疫源性等特点,其可变区的特殊结构特征及生化特性赋予其更多的优势,有可能作为新一代抗体药物研发的候选分子。【研究目的】获得抗FSHR骆驼多克隆抗体,采用该抗体对小鼠肿瘤进行抗肿瘤治疗,以探讨FSHR作为抗体药物作用靶标的有效性。【研究方法】IPTG诱导原核表达BL21-p ET-30a-fshr234及亲和层析柱纯化FSHR234重组蛋白,使用重组蛋白对新疆双峰驼进行肌肉免疫。采集少量免疫前后的骆驼外周血样,利用间接ELISA检测抗FSHR抗体的血清效价。当抗体效价达到或超过1:1×104时,从骆驼颈静脉采集300 m L血液,分离抗FSHR抗血清,并通过流式细胞术和Western Blot检测其与抗原的结合活性。免疫组化实验检测小鼠肿瘤中FSHR的表达情况。并培养CT-26肿瘤细胞,建立Balb/C小鼠CT-26移植瘤模型。注射肿瘤第6天时开始抗FSHR多抗对小鼠治疗。将荷瘤小鼠分为PBS(空白组),未免疫骆驼血清(阴性对照组)和骆驼抗FSHR多克隆抗体(实验组)等3组;每组6只小鼠,每只小鼠按20 mg/kg的剂量(即每只小鼠0.4 mg)进行尾静脉注射抗体,观察及检测抗FSHR多克隆抗体对肿瘤生长及侵袭的抑制作用。【研究结果】IPTG诱导原核表达BL21-p ET-30a-fshr234获得0.227 ug/m L FSHR重组蛋白;使用FSHR重组蛋白免疫新疆双峰骆驼获得效价为1:1.3×105的抗FSHR多克隆抗体;Western Blot结果显示骆驼抗FSHR抗血清与FSHR234重组蛋白可以特异结合;流式细胞术检测结果表明抗血清可与PC3细胞表面表达的FSHR特异结合;免疫组化检测结果显示,小鼠CT26肿瘤组织FSHR表达阳性,FSHR在肿瘤组织中及血管表面表达,即说明可以对Balb/C小鼠进行靶向于FSHR的抗体治疗。对荷瘤Balb/C小鼠的抗FSHR多克隆抗体治疗结果显示,抗FSHR多克隆抗体明显抑制小鼠移植瘤的生长。【研究结论】初步研究表明,抗FSHR的抗体对小鼠肿瘤生长具有一定抑制作用,该作用有可能是通过抑制肿瘤新生血管的形成发挥效用,确切机制还有待于进一步研究。