目的： 成功建立非酒精性脂肪变体外肝细胞模型,从细胞学层次及分子生物学水平探讨化痰祛湿活血方对 AMPK/ACC/CPT-1 信号通路的调控作用以及对甘油三酯的干预作用,从而初步揭示化痰祛湿活血方对 NAFLD 体外肝细胞模型损伤的保护作用及其可能作用机制,为进一步研究提供理论依据。 　　材料与方法： 制作化痰祛湿活血方高中低三个剂量的药物溶液,分别相当于成人正常用量的 20 倍、10 倍和 5 倍,多烯磷脂酰胆碱药物溶液相当于成人正常用量的10倍,然后以Wistar大鼠灌胃,抽取腹主动脉血制作药物血清,90%RPMI 1640 培养液+10%胎牛血清培养人正常肝细胞 L02 细胞株,每 2~3 天传代一次,将生长状态良好的细胞分为正常组、模型组、化痰活血祛湿方高剂量组、中剂量、低剂量组以及多烯磷脂酰胆碱(易善复)药物组六组；接种于六孔培养板中。除正常组外,其它各组以40ug/ml浓度的油酸作用于 L02细胞24小时,复制非酒精性脂肪变体外肝细胞模型,制作细胞爬片,以油红O染色确定造模成功后,正常组和模型组更换为正常胎牛血清培养液,治疗组则对应地以含10%药物血清的培养液即(10%药物血清+90%RMPI1640培养液)干预24小时,干预结束后分别观察各组细胞油红O染色、检测各组细胞内甘油三酯含量以及AMPK、ACC、CPT-1和AdipoR2 mRNA的表达情况。 　　结果： 　　1.油红 O 染色：正常组细胞形态正常,轮廓清晰,细胞内未见红色脂滴,细胞核着色较深,清晰可见；模型组细胞明显肿大,轮廓模糊,细胞内可见较多橘红色脂滴,并出现脂滴融合现象,细胞核染色较淡；化痰活血祛湿方高剂量组细胞边缘较模型组清晰,形态尚可,细胞内可见橘红色脂滴,但明显少于模型组,细胞核着色亦明显较模型组细胞核深；中剂量组细胞边缘模糊,细胞内仍可见少量橘红色脂滴,较模型组量少,但与高剂量组差别不大；低剂量组细胞边缘模糊,细胞内仍可见橘红色脂滴；易善复组较模型组轮廓清晰,细胞内脂滴亦较模型组有所减少。 　　2.甘油三酯含量：与正常组相比,模型组甘油三酯的含量明显升高,具有显著统计学意义(P<0.01)；化痰活血祛湿方高剂量组较模型组相比,TG含量明显降低,具有统计学意义(P<0.01)；化痰祛湿活血方中剂量组、低剂量组及易善复对照组较模型组相比,TG含量均有所降低,具有统计学意义(P<0.05),而中剂量组、低剂量组与易善复组之间 TG 含量变化差异不甚明显,统计学上无明显差异(P>0.05)；化痰活血祛湿方中、低剂量组之间的TG含量亦无明显差异,结果无统计学意义(P>0.05)。 　　3.AMPK mRNA的表达情况： 模型组AMPK mRNA较正常组表达下降,具有显著统计学差异(P<0.01)；化痰祛湿活血方高剂量组、中剂量组、低剂量组及易善复组表达均较模型组增高,具有统计学意义(P<0.05)；中剂量组与低剂量组较正常组细胞表达增加具有显著统计学意义( P<0.01),而化痰活血祛湿方高、中、低剂量组和易善复对照组之间经分析,结果无统计学意义。 　　4.ACC mRNA的表达情况：与正常组相比,其他各组 ACC基因表达均有所降低,且具有统计学意义(P<0.05)。较模型组,化痰祛湿活血方高剂量组、低剂量组和易善复组表达均有所降低,且具有统计学意义(P<0.05)。 　　5.CPT-1mRNA的表达情况：与正常组相比,化痰活血祛湿方各剂量组以及易善复组CPT-1表达均升高,较正常组具有显著统计学意义( P<0.05),而模型组较正常组升高无统计学意义；中药复方中、低剂量组较模型组 CPT-1表达升高具有统计学意义,而与易善复组比较则无统计学意义。 　　6.AdipoR2 mRNA的表达情况：与正常相比,中药各剂量组AdipoR2 mRNA表达有所降低,但无统计学意义,而易善复组 AdipoR2 mRNA表达明显增加,较模型组具有显著统计学意义(P<0.01),同时,易善复组 AdipoR2的 mRNA表达增加较中药各剂量组均有统计学意义。 　　结论： 　　1.40ug/ml 浓度的油酸作用于人正常肝细胞 L02 细胞株 24 小时,能够成功复制出非酒精性脂肪性肝病体外肝细胞模型。 　　2.化痰祛湿活血方和易善复均能够降低非酒精性脂肪性肝病体外细胞模型的甘油三酯含量,改善细胞模型油红O染色情况。 　　3.化痰祛湿活血方能够升高 AMPK、CPT-1的基因表达而降低 ACC的基因表达,从而增加脂肪酸的氧化,抑制肝内脂肪的合成,这可能为其治疗非酒精性脂肪性肝病的作用机制之一。